题目内容
【题目】利用基因工程技术培育转基因抗冻番茄.该过程需要用多种限制酶,下图依次表示EcoR I、Sma I、Nae I三种限制酶的识别序列及切割位点.
请回答:
（1）上述限制酶在特定位点切割DNA,其实质是断开DNA分子每条链中特定部位的两个核苷酸之间的_______切割后产生了____________末端.
（2）利用EcoR I 和NAE 酶切得某种鱼的抗冻蛋白基因,可与被EcoR I 和Sam I酶切后的质料连接成重组质料,原因是___________
（3）重组质料导入番茄后,欲检测抗冻蛋白基因是否转录出mRNA,需利用__________作探针.
（4）利用抗冻蛋白制备出相应的__________,然后进行抗原-抗体杂交,观察到杂交带出现,尚不足以确定转基因抗冻番茄培育是否成功.因此,还应将转基因番茄__________,以确定其耐寒能力是否提高.
【答案】 磷酸二酯键 黏性末端和平末端 相同的黏性末端之间可连接，且不同的平末端之间也可以连接 标记的含有目的基因的DNA片段（或“标记的抗冻蛋白基因”或“标记的含有目的基因的DNA单链”） 抗体 置于寒冷环境培养（或进行个体水平检测或进行抗冻实验）
【解析】注：（2）（3）错字“质料”
试题分析：基因工程的基本操作程序主要包括四个步骤：目的基因的获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定，其中基因表达载体的构建是基因工程的核心。基因工程常用的工具有工具酶和运载体，工具酶包括限制酶和DNA连接酶，运载体包括质粒、动植物病毒和噬菌体衍生物。
（1）限制酶能够识别特定的DNA脱氧核苷酸序列，并在特定的位点进行切割，作用的化学键是磷酸二脂键。据图分析，上述三种酶切割后分别产生了黏性末端、平末端、平末端。
（2）相同的黏性末端之间可连接，且不同的平末端之间也可以连接，所以利用EcoR I 和NAE 酶切得某种鱼的抗冻蛋白基因，可与被EcoR I 和Sam I酶切后的质粒连接成重组质粒。
（3）检测基因表达产物mRNA，可以用分子杂交法，即用标记的含有目的基因的DNA片段作为探针，与目的mRNA杂交。
（4）利用抗冻蛋白制备出相应的抗体，然后进行抗原-抗体杂交，观察到杂交带出现，尚不足以确定转基因抗冻番茄培育是否成功。因此,还应将转基因番茄置于寒冷环境培养，以确定其耐寒能力是否提高。
