题目内容
【题目】重叠延伸PCR技术是一种通过寡聚核苷酸链之间重叠的部分互相搭桥、互为模板,通过多次PCR扩增,从而获得目的基因的方法。该技术在扩增较长片段的DNA、不同来源的DNA片段拼接、基因的定点诱变等方面具有广泛的应用前景。右图是利用重叠延伸PCR技术扩增某目的基因的过程。其主要没计思路是用具有互补配对片段的引物(图中引物2、引物3),分别PCR,获得有重叠链的两种 DNA片段,再在随后的扩增反应中通过重叠链的延伸获得目的基因。结合所学知识,分析下列问题。
(1)引物中G+C的含量影响着引物与模板DNA结合的稳定性,引物中G+C的含量越高,结合稳定性______。
(2)在第一阶段获得两种具有重叠片段DNA的过程中,必须将引物l、2和引物3、4置于不同反应系统中,这是因为________。
(3)若在引物l和引物2组成的反应系统和引物3、引物4组成的反应系统中均复制一次,共产生________种双链DNA分子。
(4)在引物1、引物2组成的反应系统中,经第一阶段形成图示双链DNA至少要经过________ 次复制。
(5)若利用微生物扩增该目的基因,其基本步骤包括:________、________、微生物的筛选和培养、从菌群中获取目的基因。
【答案】
(1)越高
(2)吸引物2和吸引物3存在互补配对片段,置于同一反应系统中它们会发生结合而失去作用
(3)3
(4)2
(5)基因表达载体的构建 将目的基因进入受体细胞
【解析】
(1)由于一个C-C之间有三个氢键,而一个A-T之间有两个氢键,所以引物中C+C含量越高,引物与模板DNA的结合就越稳定.
(2)从图中可以看出,引物2和引物3相应的碱基之间可以进行配对,所以如果将引物2和3放在一个反应系统中,则会引起引物2和3 的失效.
(3)两个反应系统中各自形成两种DNA分子,但由于引物1和引物4形成两个与原DNA相同的DNA分子,所以含有引物1和4的DNA属于同一种DNA,故总共形成三种DNA分子.
(4)第一次复制形成的两个DNA分子分别含有引物1和引物2,图中第一阶段形成的DNA分子同时具有引物1和引物2,图示双链DNA分子至少要经过第二次复制才能形成.
(5)利用微生物扩增该目的基因,需要将目的基因导入受体细胞,而导入受体细胞首先要将目的基因与载体结合.