题目内容
【题目】胰岛素样生长因子－Ⅰ（IGF-Ⅰ）是一种活性蛋白多肽物质，它是人体内肝细胞、肾细胞、脾细胞等十几种细胞分泌的产物。某研究小组利用原核细胞表达、纯化IGF-Ⅰ，并制备其单克隆抗体。回答下列问题：
（1）以人的肝组织中的总RNA处理得到的_______为模板，加入针对IGF-Ⅰ的特异引物（如下图所示）进行PCR扩增，提取目的基因。正向引物中含有NdeⅠ酶的识别序列，逆向引物含有BamHⅠ酶的识别序列。已知NdeⅠ酶和BamHⅠ酶的识别序列均为6个核苷酸，则NdeⅠ酶和BamHⅠ酶的识别序列分别是________和_________。
正向引物为：5’-CGCATATGATGCACACCATGTCCTCCTC-3’
逆向引物为：5’-CGGGATCCCTACTTGCGTTCTTCAAATG-3’
（2）使用PCR扩增的目的基因构建基因表达载体，并用该表达载体转化大肠杆菌，通过纯化获取足量的IGF-Ⅰ。选择大肠杆菌作为受体细胞的原因是_____________。
（3）用IGF-Ⅰ处理免疫小鼠，一段时间后，处死免疫小鼠，采集血清备用。取小鼠脾细胞与_______细胞进行细胞融合得到多种杂种细胞。除对这些杂种细胞进行选择培养外，还需进行专一抗体检验。检验杂交瘤细胞的培养液时，需要进行对照实验：以检验__________作为阳性对照，以检验_______________和_____________作为阴性对照。
【答案】 cDNA -CATATG- -GGATCC- 单细胞、繁殖快、遗传物质相对较少 骨髓瘤 免疫小鼠的血清 未免疫小鼠的血清 骨髓瘤细胞的培养液
【解析】【试题分析】
本题主要考查基因工程和制备单克隆抗体的相关知识。需要先梳理相关知识，再结合题意进行分析作答。限制酶所识别的序列，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一个中心轴线，中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的，即呈回文序列。在制备单克隆抗体过程中，一般有两次筛选过程，第一次是用选择培养基筛选出杂交瘤细胞，第二次是通过克隆化培养和抗体检测进一步筛选出能产生人们所需要抗体的杂交瘤细胞。据此答题。
（1）IGF-Ⅰ是人体内肝细胞、肾细胞、脾细胞等十几种细胞分泌的产物，所以可以从人的肝组织中的获取总RNA进行反转录得到cDNA，再以该cDNA为模板，加入针对IGF-Ⅰ的特异引物（如下图所示）进行PCR扩增，提取目的基因；限制性内切酶识别DNA序列中的回文序列，据此可推知NdeⅠ酶的识别序列是-CATATG-，BamHⅠ酶的识别序列是-GGATCC-。
（2）大肠杆菌属于原核生物，单细胞、繁殖快、遗传物质相对较少，因此常被用作基因工程的受体细胞。
（3）制备单克隆抗体时，首先取已免疫的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合得到多种杂种细胞，然后对这些杂种细胞进行选择培养，并且进行专一抗体检验；检验杂交瘤细胞的培养液时，需要进行对照实验：以检验免疫小鼠的血清作为阳性对照，以检验未免疫小鼠的血清和骨髓瘤细胞的培养液作为阴性对照。
