题目内容
【题目】Bt基因即是苏云金芽孢杆菌(Badcillus thuringiensis,简称Bt)基因,因其表达产物Bt毒蛋白具有杀虫效果好、安全、高效等优点而成为应用最为广泛的转杀虫基因。下图为培育转Bt基因苗的基本操作过程。
(1)Bt基因可从构建的Bt基因组文库中获取,也可以从其cDNA文库中获取,若利用PCR技术从cDNA文库中获取Bt基因（若Bt基因序列已知）,则在PCR体系中需加入的引物序列通常为____种。
(2)在构建基因表达载体的过程中,为了方便筛选含有目的基因的细胞,作为载体的Ti质粒应含有____基因,其中____是驱动基因转录的酶识别和结合的位点,而能帮助目的基因整合到宿主细胞染色体上的序列称为______。图示将目的基因导入受体细胞的方法是_______。
【答案】2标记(抗性)启动子T-DNA(可转移DNA)农杆菌转化法
【解析】
基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术；个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
（1）若利用PCR技术从cDNA文库中获取Bt基因，需根据Bt蛋白氨基酸序列设计引物，引物的序列可以有多种，原因是一种氨基酸可能有多种密码子，对应生物DNA碱基序列就会有多种。在PCR体系中需加入其中的全部引物，若Bt基因序列已知，则引物的序列通常为2种。
（2）标记基因是作用是鉴别和筛选含有目的基因的受体细胞；启动子的作用是RNA聚合酶识别和结合的位点，驱动转录；T-DNA的作用是帮助目的基因整合到宿主细胞染色体上；将目的基因导入受体细胞的方法是农杆菌转化法。
