Question

【题目】回答下列关于生物技术实践的有关问题。

（1）为筛选胞外蛋白酶分泌型菌种，一般从___________（A． 果园中 B． 肉类加工厂周围 C． 酒厂周围 D． 草炭土）获得土样，用经___________的蒸馏水稀释，备用。

（2）培养基的配制和灭菌：根据目标微生物的特性，配制相应的培养基，装入三角瓶中盖上封口膜后，口朝上竖直摆放于高压蒸汽灭菌锅中进行灭菌。其中封口膜的作用是_______________________。影响高压蒸汽灭菌效果的因素有温度、压力、时间，以及_______________________等（答2点即可），若对含葡萄糖的培养基进行灭菌，通常设置的压力要求是_______________________。

（3）扩大培养：将土壤稀释液接种于以白蛋白作为唯一____________的液体培养基中，进行振荡培养。振荡培养使微生物繁殖较快的原因是____________________________________________（答2点即可）。

（4）分离纯化：将菌液稀释成10-3、10-4、10-5、10-6浓度的稀释液，取各浓度稀释液0．1mL分别涂布到LB培养基和选择培养基。将培养皿倒置放入37℃恒温箱中培养24h，观察菌落数。其中涂布完成后的玻璃刮刀需要进行的处理是___________________________________。

Answer 1

【答案】B 高压蒸汽灭菌 既通气又不使杂菌进入 灭菌材料和数量、锅内空气含量 500mg/cm2压力 氮源 供氧、充分利用培养基 灼烧并冷却

【解析】

1. 实验室常用的灭菌方法

①灼烧灭菌：将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他金属工具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌，此外，在接种过程中，试管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通过火焰燃烧来灭菌；

②干热灭菌：能耐高温的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿(吸管、培养皿)和金属用具等，可以采用这种方法灭菌；

③高压蒸汽灭菌：将灭菌物品放置在盛有适量水的高压蒸汽灭菌锅内，为达到良好的灭菌效果，一般在压力为100kPa，温度为121℃的条件下，维持15~30min。

2. 培养基的营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。选择培养基是在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长。稀释平板法在培养基上分离、培养出微生物的单个菌落，以便于计数、移植、分离，从而达到纯培养的目的。

（1）肉类的主要成分是蛋白质，因此为筛选胞外蛋白酶分泌型菌种，一般从B肉类加工厂周围获得土样，用高压蒸汽灭菌的蒸馏水稀释，涂布到含有淀粉的选择培养基上培养。

（2）高压蒸汽灭菌过程中封口膜的作用是既通气又不使杂菌进入，影响高压蒸汽灭菌效果的因素有温度、压力、时间，以及灭菌材料和数量、锅内空气含量等，若对含葡萄糖的培养基进行灭菌，通常设置的压力要求是500mg/cm2压力。

（3）扩大培养：蛋白酶可以专一性分解蛋白质，因此根据筛选菌种的特点，将土壤稀释液接种于以白蛋白作为唯一氮源的液体培养基中，进行振荡培养。振荡培养可以使供氧充分，同时使微生物能够充分利用培养基中的养分，使微生物繁殖较快。

（4）分离纯化：利用稀释涂布平板法进行分离纯化。将菌液稀释成10-3、10-4、10-5、10-6浓度的稀释液，取各浓度稀释液0．1mL分别涂布到LB培养基和选择培养基。将培养皿倒置放入37℃恒温箱中培养24h，观察菌落数。其中涂布完成后的玻璃刮刀需要进行灼烧灭菌后并冷却处理。