Question

【题目】Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗，其技术流程如图（图中数字序号表示的是相关过程）。请回答下列有关问题：

(1)过程①利用的技术是_______________,过程②利用的技术是_______________,过程③中涉及到了基因工程技术，其中作为受体细胞的是_______________。

(2)过程③中获取的目的基因是_______________，可以根据该基因的____________设计引物，利用PCR技术扩增目的基因片段。按此方法和图示技术流程，完成 Rag2基因缺失小鼠的基因治疗涉及的酶有___________________________和耐高温的DNA聚合酶(Taq酶)等。

(3)图中造血干细胞中的遗传物质至少有 __________个来源。为检测 Rag2基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的蛋白质,用_________________进行杂交实验。

Answer 1

【答案】 （体细胞）核移植 早期胚胎培养 ES细胞 正常的Rag2基因 脱氧核苷酸序列(或碱基对序列或遗传信息） 限制性核酸内切酶、DNA连接酶和胰蛋白酶 三 抗Rag2蛋白的抗体

【解析】试题分析：熟记并理解动物细胞培养、核移植技术、基因工程的基本操作程序及其应用等相关的基础知识、形成清晰的知识网络。在此基础上结合题意并从图示中提取信息作答。

(1) 过程①是将培养的上皮细胞的细胞核移入去核的卵母细胞形成重组细胞，进而得到重组胚胎，因此利用的技术是（体细胞）核移植技术。过程②利用的是早期胚胎培养技术。过程③是借助基因工程技术，将目的基因导入ES细胞，即作为受体细胞的是ES细胞。

(2) 过程③中获取的目的基因是正常的Rag2基因。扩增Rag2基因，需根据一段已知Rag2基因的脱氧核苷酸序列(或碱基对序列或遗传信息）设计引物。图示中，获得单个的上皮细胞需用胰蛋白酶；在将正常的Rag2基因导入ES细胞前需要用到限制性核酸内切酶、DNA连接酶构建基因表达载体；利用PCR技术扩增目的基因片段的过程中离不开耐高温的DNA聚合酶(Taq酶)等酶。

(3) 图中造血干细胞中的遗传物质至少有三个来源，分别是Rag2基因缺失小鼠的上皮细胞的核基因、卵母细胞的细胞质基因和目的基因是（正常的Rag2基因）。为检测 Rag2基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的蛋白质，用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验。