题目内容

【题目】GDNF是一种神经营养因子.对损伤的神经细胞具有营养和保护作用.研究人员构建了含GDNF基因的表达载体(如图1所示),并导入到大鼠神经干细胞中,用于干细胞基因治疗的研究.请回答:

1)在分离和培养大鼠神经干细胞的过程中,使用胰蛋白酶的目的是

2)构建含GDNF基因的表达载体时,需选择图1中的 限制酶进行酶切.

3)经酶切后的载体和GDNF基因进行连接,连接产物经筛选得到的载体主要有三种:单个载体自连、GDNF基因与载体正向连接、GDNF基因与载体反向连接(如图1所示).为鉴定这3种连接方式,选择HpaI酶和BamHI酶对筛选的载体进行双酶切,并对酶切后的DNA片段进行电泳分析,结果如图2所示.图中第 泳道显示所鉴定的载体是正向连接的.

4)将正向连接的表达载体导入神经干细胞后,为了检测GDNF基因是否成功表达,可用相应的 与提取的蛋白质杂交.当培养的神经干细胞达到一定的密度时,需进行 培养以得到更多数量的细胞,用于神经干细胞移植治疗实验.

【答案】1)使细胞分散开

2XhoⅠ

3

4)抗体 传代

【解析】试题分析:(1)动物细胞培养时,可用胰蛋白酶或胶原蛋白酶作用,使细胞分散开.

2)质粒上有XhoⅠ识别位点,而且在启动子之后,所以选用XhoⅠ限制酶进行酶切.

3)泳道仅有一种条带,属于载体自连;泳道有两种条带,且长度分别与质粒和GDNF基因长度相同,为正向连接;泳道有两种条带,长度与BamHⅠ酶切后结果相同,为反向连接.

4)检测基因是否表达采用抗原抗体杂交法.培养动物细胞采用动物细胞培养法,当细胞密度达到一定程度,需要进行分瓶,进行传代培养.

故答案为:(1)使细胞分散开

2XhoⅠ

3

4)抗体 传代

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