Question

【题目】苹果树腐烂病由真菌感染引起，是限制苹果产量的重要因素之一，目前该病以化学防治为主。为了开发生物防治的途径，研究者拟从土壤中分离筛选出能抑制苹果树腐烂病菌生长的芽孢杆菌。实验流程如图1：

（1）分离筛选土壤中的芽孢杆菌
图1中①取5g土壤加入____________ mL无菌水中充分震荡得到10-1的土壤悬液。进行系列稀释后用___________法进行接种，每个浓度重复3次。将接种后的平板________，以防止冷凝水滴落造成污染。37℃条件下培养24小时，根据__________特征鉴别出芽孢杆菌并进一步纯化。

（2）筛选能抑制苹果树腐烂病菌生长的芽孢杆菌

图1中，应取直径为5mm的____________的菌落移置于A处，B处接种______。培养3～5天，测量并计算抑菌率。筛选出抑菌率最高的菌株，抑菌效果如图2。请将抑菌率的计算公式补充完整：抑菌率（%）= _____ /(D-5)×100%（用图2中的字母表示）

（3）测定筛选出的抗菌菌株对感染了苹果树腐烂病菌枝条的抑菌率
实验过程如表1，请在空白处补充相关内容。_______

在相同且适宜的条件下培养，7天后测量并计算抑菌率。实验结果如表2。

由表中数据可知：发酵原液对苹果树腐烂病菌有明显的抑制作用。依据是随着发酵滤液稀释倍数的不断增加，__________。

（4）请你说出与化学防治相比，生物防治的优势是__________。

Answer 1

【答案】45 涂布平板 倒置 菌落 苹果腐烂病菌 芽孢杆菌 D-d 健康 不同稀释倍数的抗菌菌株发酵滤液 病斑面积不断扩大，抑菌率逐渐降低 降低环境污染；减少化学药剂在果实中的残留；对其他生物扰动小

【解析】

自然界中目的菌株的筛选的依据是根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找．实验室中目的菌株的筛选的原理是利用选择培养基人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度．pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。

微生物的灭菌方法主要有高压蒸汽灭菌法、干热灭菌和灼烧灭菌，接种方法主要有稀释涂布平板法和平板划线法。

（1）要得到10-1的土壤悬液，图1中①取5g土壤，则应该加入45 mL无菌水中充分震荡。再继续进行梯度稀释，通过稀释涂布平板法进行接种，每个浓度重复3次；避免冷凝水滴落造成污染，故将接种后的平板倒置放在培养箱中培养。37℃条件下培养24小时，根据菌落特征鉴别出芽孢杆菌并进一步纯化。

（2）通过实验设计的对照原则和单因素变量原则，在图1中，对照组的A处只接种苹果腐烂病菌，实验组在A处接触了苹果腐烂病菌的四周接种B芽孢杆菌，培养3～5天，测量并计算抑菌率。通过图2可的对照组，可测定A处苹果腐烂病菌的直径，且接种时苹果腐烂病菌的直径为5mm，则苹果腐烂病菌的生长直径为D-5，实验组在A接种苹果腐烂病菌的四周接种了芽孢杆菌，且有一定的抑菌效果，抑制苹果腐烂病菌直径的长度为D-d，故抑菌率（%）= (D-d) /(D-5)×100%。

（3）通过实验设计的对照原则和单因素变量原则以及无关变量适宜且相同分析表1，可知选材应该选取“红富士”品种健康的果树枝条进行消毒和打孔。通过单因素变量原则可知，对照组涂抹等量的无菌水，则实验组应该涂抹等量的筛选出来的具有抗菌作用的芽孢杆菌。通过表2中数据分析可知：随着发酵滤液稀释倍数的不断增加，病斑面积不断扩大，抑菌率逐渐降低，故发酵原液（即不稀释的芽孢杆菌菌液）对苹果树腐烂病菌有明显的抑制作用。

（4）生物防治与化学防治相比，生物防治具有降低环境污染；减少化学药剂在果实中的残留；对其他生物扰动小等的优势。