Question

【题目】普通棉花中含β-甘露糖苷酶基因（GhMnaA2）,能在纤维细胞中特异性表达，产生的β-甘露糖苷酶催化半纤维素降解，棉纤维长度变短，为了培养新的棉花品种，科研人员构建了反义GhMnaA2基因表达载体，利用农杆菌转化法导入棉花细胞，成功获得转基因棉花品种，具体过程如下，请分析回答：

（1）①和②过程中所用的限制性内切酶分是、。
（2）基因表达载体除了图示组成外，至少有等（至少答两个）。
（3）③过程中用酶切法可鉴定正、反义表达载体。用SmaⅠ酶和NotⅠ酶完全切割正义基因表达载体获得0．05kb、3．25kb、5．95kb、9．45kb四种长度的DNA片段，则用NotⅠ酶切反义基因表达载体获得DNA片段的长度应是和。
（4）④过程中利用农杆菌介导转化棉花细胞的过程中，整合到棉花细胞染色体DNA的区段是 ， 转化后的细胞再通过形成植物体。
（5）导入细胞内的反义GhMnaA2转录的mRNA能与细胞内的GhMnaA2转录的mRNA互补配对，从而（促进或抑制）基因的表达，其意义是。

Answer 1

【答案】
（1）HindⅢ,BamHⅠ SmaⅠ
（2）复制原点、终止子、标记基因等
（3）6.0kb,12.7kb
（4）（含有E6启动子和GhMnaA2基因的）T－DNA,植物组织培养
（5）抑制,阻止β-甘露糖苷酶合成,使棉纤维更长
【解析】（1）纤维细胞E6启动子前后含有限制酶HindⅢ和BamHⅠ的切割位点，因此可以用这两种酶切割；②是构建反义GhMnaA2基因表达载体的过程，反义GhMnaA2基因前后有限制酶SmaⅠ的切割位点，因此可以该酶切割获取目的基因。
（2）基因表达载体由启动子、目的基因、复制原点、终止子和标记基因等部分组成。
（3）③过程中，用SmaⅠ酶和NotⅠ酶切正义基因表达载体获得0．05kb、3．25kb、5．95kb、9．45kb四种长度的DNA片段，则用NotⅠ酶切反义基因表达载体获得DNA片段的长度应是0．05kb+5．95kb=6．0kb、3．25kb+9．45kb=12．7kb。
（4）农杆菌介导转化棉花细胞的过程中，整合到棉花细胞染色体DNA的区段是含有E6启动子和GhMnaA2基因的T-DNA．转化后，还需依据植物细胞的全能性，采用植物组织培养技术将受体细胞培养形成植物体。
（5）导入细胞内的反义GhMnaA2转录的mRNA能与细胞内的GhMnaA2转录的mRNA互补配对，从而抑制基因的表达的翻译过程，进而阻止β-甘露糖苷酶合成，使棉纤维更长。
【考点精析】解答此题的关键在于理解基因工程的原理及技术的相关知识，掌握基因工程的原理是利用DNA重组技术，以及对基因工程的应用的理解，了解植物基因工程：抗虫、抗病、抗逆转基因植物，利用转基因改良植物的品质；动物基因工程：提高动物生长速度、改善畜产品品质、用转基因动物生产药物；基因治疗：把正常的外源基因导入病人体内，使该基因表达产物发挥作用．