题目内容
【题目】下图表示我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪的具体培育过程。请据图回答下列问题：
（1）图中A过程是采用从___________中获取绿色荧光蛋白基因，该文库中含有该生物部分基因序列。如果对已有的绿色荧光蛋白基因进行大量扩增，需要用_________方法，该方法的原理是DNA复制，这项技术需要用到Taq酶，该酶需从________的末端开始催化子链的延伸。
（2）将绿色荧光蛋白基因导入成纤维细胞，B过程首先要构建_________，然后通过_______________________法导入成纤维细胞。
（3）从猪胚胎中获取单个的成纤维细胞进行培养，需用C______酶处理猪胚胎的部分组织。
（4）E过程得到卵母细胞后，要做去核处理，最常用方法是_________________________。
（5）G过程需要用___________（化学）方法激活重组细胞，使之完成分裂和发育进程，并最终发育为早期胚胎。
（6）Ⅰ过程可以在分子水平上用___________________方法检测绿色荧光蛋白基因是否成功表达。
【答案】cDNA文库 PCR技术 引物 基因表达载体 显微注射 胰蛋白酶或者胶原蛋白酶 显微操作去核法 乙醇、蛋白酶合成抑制剂或者钙离子载体 抗原-抗体杂交
【解析】
分析图解可以看出，该荧光克隆猪涉及了多项生物工程技术：首先导入目的基因的猪的成纤维细胞，要经过动物细胞培养筛选出转基因体细胞，然后该细胞与成年母猪的卵细胞进行细胞核移植获得重组细胞，重组细胞经过早期胚胎培养到桑葚胚或囊胚期，最后经过胚胎移植技术将早期胚胎移植到代孕母猪子宫内，最后生成荧光克隆猪。该过程中利用了基因工程、动物细胞培养、细胞核移植、早期胚胎培养和胚胎移植等技术。
（1）根据题意分析，A过程是从含有该生物部分基因序列的文库中获得目的基因的，因此该文库为cDNA文库；扩增目的基因常用PCR技术，需要特殊的耐高温DNA聚合酶（Taq酶）的催化，该酶需从引物的末端开始催化子链的延伸。
（2）图中B过程是将绿色荧光蛋白基因导入成纤维细胞的过程，该过程首先要构建构建基因表达载体，然后通过显微注射技术将该基因表达载体导入成纤维细胞（动物细胞）。
（3）图中猪胚胎的部分组织需要用胰蛋白酶或者胶原蛋白酶处理，才能获得单个的成纤维细胞。
（4）E过程得到卵母细胞常用显微操作去核法去掉其细胞核，以作为核移植的受体细胞。
（5）G过程为重组细胞培养成早期胚胎的过程，该过程需要用乙醇、蛋白酶合成抑制剂或者钙离子载体方法激活重组细胞，使之完成分裂和发育进程，并最终发育为早期胚胎。
（6）Ⅰ过程绿色荧光蛋白基因表达产生的荧光蛋白可以用抗原-抗体杂交技术进行检测。
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