题目内容
【题目】已知图1，图2中标注了相关限制酶的酶切位点，且限制酶的切点是唯一的，外源DNA插入会导致相应的基因失活．请回答有关基因工程操作的问题： 
（1）图1表示的是一个经过的作为载体的质粒，其化学本质是 ． 作为基因表达载体，除图1所示结构外，还需具有 ．
（2）根据图中所给信息，构建基因表达载体时，应选用的限制酶是 ． 若将基因表达载体导人大肠杆菌，一般先用钙离子处理，使其成为细胞，以利于吸收周围环境中的DNA分子；然后让基因表达载体在中与该细胞混合，调控温度完成转化过程．
（3）为了筛选出含目的基因的大肠杆菌，应在培养基中添加 ， 培养一段时间后，平板上长出的菌落，用PCR技术鉴定时，所用的引物是图2中 ．
【答案】
（1）人工改造；环状DNA分子；目的基因和终止子
（2）BclI和HindⅢ；感受态；缓冲液
（3）四环素；引物甲和引物丙
【解析】解：（1）图1表示的是一个经过人工改造的作为载体的质粒，质粒的化学本质为小型环状DNA；基因表达载体的组成包括启动子、终止子、目的基因和标记基因等．（2）选择的限制酶应在目的基因两端存在识别位点，但BamHⅠ可能使质粒中的启动子丢失，因此只能选BclI和HindⅢ两种限制酶切割．将目的基因导入微生物细胞常用感受态细胞法，即用Ca2+处理，使其处于感受态，以利于吸收周围环境中的DNA分子；然后让基因表达载体在缓冲液中与该细胞混合，调控温度完成转化过程．（3）了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，根据质粒上的抗性基因，应在筛选平板培养基中添加四环素．PCR技术要求两种引物分别和目的基因的两条单链结合，沿相反的方向合成子链，故所用的引物组成为图2中引物甲和引物丙． 所以答案是：（1）人工改造 环状DNA分子 目的基因和终止子（2）BclI和HindⅢ 感受态 缓冲液（3）四环素 引物甲和引物丙
【考点精析】掌握基因工程的原理及技术是解答本题的根本，需要知道基因工程的原理是利用DNA重组技术．
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