Question

【题目】重组人血白蛋白和干扰素α-2b（rHSA，IFNα-2b）是血液制品俗称“生命制品”的一种替代品，是临床非常珍贵的药物，目前利用基因工程，以酵母菌为工程菌生产，具有纯度高，生产效率高等特点。其实验流程如甲图，乙图是pHIL-D2质粒（载体）的图谱，据图回答：

（1）RT-PCR是利用人血白细胞中的mRNA逆转录获取人IFNα-2b 的cDNA，以此cDNA为模板，扩增人IFNα-2b基因，那么RT-PCR要用到的酶是__________________。在获得rHSA/IFNα-2b重组基因时，要用到限制酶，大多数限制酶的识别序列由____个核苷酸组成。

（2）甲图中，用酵母菌做表达工程菌而不用大肠杆菌做工程菌，推测可能的原因是_______________________________________________________________________。

（3）本实验的表达载体如乙图，除了目的基因外，还必须有启动子和终止子，启动子的本质是__________________，其功能是____________________________________。

（4）乙图中Ampinicillin表示氨苄青霉素抗性基因，其作用是______________________。

（5）基因工程最后一步是目的基因的检测与鉴定，请说出分子水平检测的物质有________________________________________________________________________。

Answer 1

【答案】 逆转录酶和Taq酶（热稳定性的DNA连接酶） 6 酵母菌是真核生物，生产的产物（重组人血白蛋白和干扰素α-2b）活性高，产量高 一段有特殊结构的DNA片段 促进目的基因转录出mRNA 供重组DNA的鉴定与选择 目的基因、转录出的mRNA、翻译的产物（蛋白质）

【解析】本题考查基因工程的操作过程，意在考查学生对基因工程操作过程知识点的识记和理解。

（1）RT-PCR又称逆转录PCR，是利用一条RNA链逆转录成为互补DNA，再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。此过程需要的酶是逆转录酶和Taq酶。大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成。

（2）由于大肠杆菌细胞不具备内质网和高尔基体，从而使初始合成的蛋白质不能进一步被加工、包装和转运，而酵母菌是真核生物，生产的产物（重组人血白蛋白和干扰素α-2b）活性高，产量高，因而用大肠杆菌做成的工程菌不如用酵母菌做成的工程菌效果好。

（3）启动子是基因的一个组成部分，其化学本质是DNA的部分序列(存在于基因编码区的上游，控制基因转录的起始时间和基因表达的程度，促进目的基因转录出mRNA。

（4）氨苄青霉素抗性基因属于标记基因，在基因工程意义上来说，它是重组DNA载体的重要标记，通常用来检验转化成功与否，可供重组DNA的鉴定与选择。

（5）基因工程最后一步是目的基因的检测与鉴定，分子水平检测的有：1.对标记基因的检测，通常用DNA分子杂交技术，来检验标记基因（目的基因）是否成功的导入受体细胞。2.RNA分子杂交技术，来看目的基因导入后是否成功转录出信使RNA。3.用抗原-抗体检验，来验证导入基因是否成功表达出蛋白质。

[点睛]：本题以基因工程应用为背景，考查学生分析材料信息解答问题的能力，对此类题型的解题技巧：1. 认真阅读材料，分析其中的关键语句，充分联系教材，找到与教材的衔接点；2. 给合题文要求，对于联系教材的有关原理、概念等，尽可能用教材语言规范答题。