Question

【题目】回答下列（一）、（二）小题：

（一）某些土壤细菌可将尿素分解，供植物利用，回答与微生物培养有关的问题：

（1） 用来筛选分解尿素细菌的培养基添加______作为凝固剂，培养基中K2HP04的作用是 ______（答出两点）。

（2）因尿素加热会分解，因此使用G6玻璃砂漏斗进行过滤，漏斗在使用后需用________________浸泡，抽滤去除后再用蒸憾水洗至洗岀液为中性，干燥后保存。其他物质及器材在使用高压蒸汽灭菌锅进行灭菌时，下面操作正确的是______________（ A灭菌锅内放入的物品应尽量排满实 B. LB培养基可分装至培养血中进行灭菌 C.移液管灭菌前应在其上端用镊子子放入少量脱脂棉 D.三角刮刀、接种环、G6玻璃砂漏斗皆可进行高压蒸汽灭菌）

（3）能分解尿素的细菌不能以尿素的分解产物CO2作为碳源，原因是________________。但可用葡萄糖作为碳源，进入细菌体内的葡萄癇除了可为细胞生命活动提供能量，还可以______________。在4个细菌培养基平板上，均接种稀释度为10-5的土壤稀释液0.1ml，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、178和191，则土壤稀释液中的细菌密度为_________________。

（二）单克隆抗体应用比较广泛，经抗原免疫的小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞融合后制备的鼠源单抗，会引起人体的不良反应。科学家通过对鼠和人控制抗体合成的基因进行拼接，实现了对鼠源单抗的改造。下图表示形成鼠-人嵌合抗体的过程。请据图回答：

（1）制备鼠源单抗时，需每隔2周用抗原注射小鼠一次，共注射三次，其目的是产生更多的_______________ 。需要将杂交瘤细胞接种到多孔培养板上，进行抗体阳性检测，之后稀释、培养、再检测，并多次重复上述操作，其目的是筛选______的杂交瘤细胞。杂交细胞培养过程中，为防止有害代谢物的积累，可采用______的方法。

（2）构建人鼠嵌合抗体基因时，需从小鼠杂交瘤细胞____________筛选序列未知的可变区基因，再钓取人抗体恒定区基因，然后利用__________酶将两者拼接。

（3）嵌合抗体作为一种较为成熟的慕因工程抗体，其__________性和亲和力依赖于能否准确获取可变区基因，而其表达水平主要取决于表达载体和宿主细胞。下列表达系统不属于嵌合抗体宿主细胞的最佳选择的是__________。（A.大肠杆菌 B. HeLa细胞C.小鼠骨髓瘤细胞 D.小鼠成纤维细胞）

Answer 1

【答案】琼脂糖 提供无机营养、保持pH稳定 HC1 D 分解尿素的细菌是异养生物 提供原料（或碳骨架） 1.75×108个/ml 效应B细胞（浆细胞或淋巴细胞） 能产生特定抗体 更换培养液 基因文库 限制性核酸内切酶、DNA连接酶 特异 A

【解析】

培养基的成分：水、碳源、氮源、无机盐、生长因子等。

筛选分解尿素的微生物应该用以尿素为唯一氮源的选择培养基进行筛选。

常用的灭菌方法：干热灭菌法、灼烧灭菌法、高压蒸汽灭菌法等。

基因工程的工具：限制酶、DNA连接酶和运载体。

单克隆抗体制备的过程中，需要经过瘤细胞和浆细胞的融合，该过程需要经过选择培养基筛选出杂交瘤细胞和专一抗体检测筛选出能分泌专一抗体的杂交瘤细胞，最后经过体内或体外动物细胞培养，可以获得大量的杂交瘤细胞和单克隆抗体。

（一）（1）培养基中常加入琼脂糖作为凝固剂制作固体培养基。培养基中K2HPO4可以提供无机营养、保持pH稳定。

（2）因尿素加热会分解，因此使用G6玻璃砂漏斗进行过滤，漏斗在使用后需用HC1浸泡，抽滤去除去酸，再用蒸馏水洗至洗岀液为中性，干燥后保存。其他物质及器材在使用高压蒸汽灭菌锅进行灭菌时，

A、待灭菌的物质放置不宜过紧，A错误；

B、LB培养基应该先灭菌，再在超净工作台上分装到培养皿中，B错误；

C、脱脂棉吸水后容易引起污染，故不能用脱脂棉，C错误；

D、三角刮刀、接种环、G6玻璃砂漏斗皆可进行高压蒸汽灭菌，D正确。

故选D。

（3）能分解尿素的细菌是异养生物，不能利用CO2作为碳源，需要利用有机物如葡萄糖作为碳源。葡萄糖可为细胞生命活动提供能量，还可以为其他物质的合成提供原料。在4个细菌培养基平板上，均接种稀释度为105的土壤稀释液0.1ml，培养一段时间后，平板上长岀的细菌菌落数分别为13、156、178和191，进行计数时应该选择数目在30-300之间的菌落，故土壤稀释液中的细菌密度为：（156+178+191）÷3÷0.1×105=1.75×108个/ml。

（二）（1）制备鼠源单抗时，三次注射抗原是为了产生更多的浆细胞。把杂交瘤细胞接种到多孔培养板上，进行抗体阳性检测，是为了筛选能产生特定抗体的杂交瘤细胞，筛选出的杂交瘤细胞可以进行体内或体外培养，细胞培养过程中，可以通过更换培养液来防止有害代谢物的积累。

（2）嵌合抗体是由鼠抗体的可变区和人抗体的恒定区重组而成，故构建人鼠嵌合抗体基因时，可以从小鼠杂交瘤细胞基因文库筛选序列未知的可变区基因，再钓取人抗体恒定区基因，利用限制酶和DNA连接酶将两者拼接重组，将鼠源抗体改造成鼠-人嵌合抗体基因。

（3）嵌合抗体的特异性和亲和力依赖于能否准确获取可变区基因，而其表达水平主要取决于表达载体和宿主细胞。嵌合抗体在核糖体合成，需要经过内质网、高尔基体的加工，故可以选择HeLa细胞、小鼠骨髓瘤细胞、小鼠成纤维细胞等真核细胞作为受体细胞，大肠杆菌是原核细胞，不含有内质网、高尔基体，不能对抗体进行加工，不适宜作为嵌合抗体宿主细胞的最佳选择。故选A。