题目内容
【题目】石油烃是石油管道泄漏的主要污染物。为了筛选出分解石油烃能力较强的微生物，进行了如下系列操作。请回答问题：
（1）分解石油烃的微生物一般从土壤中分离，获取土壤样品的取样地点最好选在_____________。
（2）图1表示获取土壤样品后的研究过程。
为了能有效地分离出分解石油烃的微生物，①③号瓶所用的液体培养基的成分共有的特点是________，从而有利于分解石油烃的微生物的生长。
（3）可采用图2中平板乙所示的____________(方法）检测图1的③号瓶中分解石油烃的微生物数量。在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养一段时间，这样做的目的是_____________；然后，将图1③号瓶中的1mL菌液稀释100倍，在3个平板上用该方法分别接入0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每毫升该菌液中的活菌数为______________个。
（4）Ⅰ.若实验室采用图3中的操作分离纯化优良菌种，首次接种最合理的排序是_________。
Ⅱ.下列有关操作正确的是______________（填字母）。
A.划线分离时，需要把接种环深入到培养基中进行接种
B.划线时要将最后一区域的划线与第一区域的划线相连
C.超净工作台在使用前，可用紫外线灯杀菌
【答案】 被石油污染处 以石油烃为唯一碳源 稀释涂布平板法 检测培养基灭菌是否合格 3.8×104 ②①④①③② C
【解析】试题分析：本题的知识点是微生物培养过程中的无菌技术，分离微生物的常用的接种方法和接种操作过程，主要考查学生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力。为筛选某种特定的微生物，常用选择培养基对微生物进行初步筛选，要筛选能分解石油的的微生物，就应该以石油为唯一碳源。不能分解石油的微生物由于无法获得碳源而死亡。在微生物的纯化培养过程中需要接种，接种最常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法。接种的目的是使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，并在培养基表面形成单个细菌繁殖而成的子细胞群体--菌落。
（1）要获取相应的菌种，应到相应的环境中获取，获取土壤样品的取样地点最好选在被石油污染明显处。
（2）为了能有效地分离出分解石油烃的微生物，过程①一④所用培养基，其成分的特点是以石油烃为唯一碳源，从而有利于目的菌的生长，抑制其他微生物的生长。
（3）据图乙可以看出，图乙平板的菌落基本呈均匀分布，所用操作方法为稀释涂布平板法。在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养一段时间，这样做的目的是检测培养基灭菌是否合格，3个平板上的平均菌落数分别为（39+38+37）/3=38个，因此每毫升该菌液中的活菌数为（C/V）×M=（38/0.1）×100=3.8×104个。
（4）I．平板划线的操作的基本步骤是：右手持接种环，经火焰灭菌，即图中的②；待凉后，在火焰旁打开盛有菌液的试管棉塞，并将试管口过火焰，即图中的①；将以冷却的接种环伸入菌液，沾取一环菌液，即图中的④；将试管口过火焰并塞上棉塞，即图中的①；左手斜持琼脂平板，并将皿盖打开一条缝，右手于火焰近处將接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖，接种环不应划破培养基表面，即图中的③；烧灼接种环，杀灭环上残留菌液，即图中的②；待冷却后从第一区域划线的末端开始往第二区内划线，重复以上操作，在第三四五区内划线，注意不要将最后一区的划线与第一区相连。故正确的顺序是②①④①③②。
II．划线分离时，不能把接种环深入到培养基中进行接种，只能在培养基表面进行划线操作，A错误；划线时最后一区的划线不能与第一区的划线相连，B错误；超净工作台在使用前，可用紫外线灯照射30分钟，以杀死物体表面或空气中的微生物，C正确。
