Question

【题目】下图1是可作为基因载体的质粒，图2是含有目的基因的外源DNA。

（1）若将图1中质粒和图2中含目的基因的外源DNA通过限制酶处理后进行拼接形成重组质粒，那么最好应选用___________限制酶。对符合设计要求的重组质粒用 SmaⅠ EcoRⅠ和HindⅢ三种酶同时进行酶切，假设所用的酶均可将识别位点完全切开，则可得到___________种DNA片段

（2）若选用EcoRⅠ处理后，形成重组质粒，经检测，部分含有重组质粒的受体细胞中目的基因不能正确表达，其最可能的原因是______________________。

（3）试管婴儿技术为许多不孕夫妇解决了不育问题，而设计试管婴儿技术必须获得政府部门的相关批准证书，以防该技术的滥用。设计试管婴儿所引发的伦理问题主要是将此技术用于设计婴儿性别及________。一般我们所说的试管婴儿技术与设计试管婴儿相比，不必经过___________这一步骤。

（4）人类要实现可持续发展，必走生态经济之路，生态经济所遵循的主要原则和实现的重要手段分别是___________和___________。在进行林业工程建设时，一方面要号召农民种树，保护环境。另一方面要考虑贫困地区农民的生活问题，如粮食、烧材以及收入等问题，其体现了生态工程的基本原理是_______（只填一个）。

Answer 1

【答案】EcoRⅠ和 HindⅢ 4 同种限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因与质粒反向连接 不适合的胚胎处理问题 基因检测（遗传学诊断） 循环经济 生态工程 整体性原理

【解析】

基因工程技术的基本步骤：

1、目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。

2、基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

3、将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

4、目的基因的检测与鉴定：

（1）分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。

（2）个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

（1）据图分析，根据不同限制酶在目的基因和质粒上的识别位点可知：①不能用SmaⅠ切割，因为用该酶切割后将导致目的基因和标记基因被破坏；②不能用SnaBⅠ和BamHⅠ切割，因为这两种酶的酶切位点没有同时出现在质粒和目的基因上；③也不能用EcoRⅠ一种酶来切割，因为切割之后形成的片段易发生自身环化现象。因此只能用EcoRⅠ和HindⅢ两种酶同时切割。用EcoRⅠ和HindⅢ两种酶切割后经重组形成的符合要求的重组质粒上含有2个SmaⅠ、1个EcoRⅠ、1个HindⅢ识别位点，因此经SmaⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ三种酶同时进行酶切，该环状DNA分子将被切割成4种小的DNA片段。

（2）若用EcoRⅠ处理，因为同种限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因与质粒反向连接，故导致部分含有重组质粒的受体细胞中目的基因不能正确表达。

（3）设计试管婴儿所引发的伦理问题主要是将此技术用于设计婴儿性别及不适合的胚胎处理问题。一般情况下试管婴儿技术与设计试管婴儿相比，不必经过遗传学诊断（基因检测）这一步骤。

（4）生态经济所遵循的主要原则是循环经济，而实现这一目标的重要手段是生态工程；在进行林业工程建设时，一方面要号召农民种树，保护环境。另一方面要考虑贫困地区农民的生活问题，如粮食、烧材以及收入等问题，其同时兼顾了社会、经济和自然，因此其遵循整体性原理。