题目内容
【题目】图为某种质粒表达载体简图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI的酶切位点，ampR为青霉素抗性基因，tctR为四环素抗性基因，P为启动子，T为终止子，ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点。据图13回答下列问题：
（1）若要构建重组质粒，需要对目的基因进行测序，并将测序结果与___________酶的识别序列进行对比，以确定选用何种酶。该类酶作用的部位是____________键。
（2）若用EcoRI酶对目的基因和质粒进行酶切，再用DNA连接酶处理，则由两个DNA片段连接形成的产物有______种。用上述几种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验。之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是_____________。
（3）为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶是__________________________________。
（4）酶与底物能特异性结合。以下研究利用了生物分子间的特异性结合的有___
A.分离得到核糖体，用蛋白酶酶解后提rRNA
B.用无水乙醇处理菠菜叶片，提取叶绿体基粒膜上的光合色素
C．通过分子杂交手段，用荧光物质标记的目的基因进行染色体定位
D．将抑制成熟基因导入番茄，其mRNA与催化成熟酶基因的mRNA互补结合，终止后者翻译，延迟果实成熟。
（5）从变异的角度看，基因工程的原理是_____________；而植物细胞杂交的原理是_______________________。
【答案】限制性DNA内切酶 磷酸二酯键 3 载体和载体连接物 EcoRI、BamHI ACD 基因重组 略
【解析】
(1)若要构建重组质粒，一般要用同一种限制酶进行切割，形成相同的黏性末端，然后再用DNA连接酶连接。因此在目的基因和质粒上必须存在同一种限制酶的切割位点，需要对目的基因进行测序，以确定选用何种酶，限制酶的作用的部位是磷酸二酯键。
(2)若用EcoRI酶对目的基因和质粒进行酶切，再用DNA连接酶处理，则由两个DNA片段连接形成的产物有3种：重组质粒、目的基因与目的基因连接物、载体和载体连接物。因为EcoRI酶的识别位点刚好在四环素抗性基因上，因此重组质粒中，该抗性基因已经被破坏，而目的基因与目的基因连接物上没有该基因，只有载体和载体连接物上把两个切割后的四环素抗性基因进行拼接形成两个完整的四环素抗性基因。
(3)为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用EcoRI和BamHI两种酶同时切割目的基因和质粒。因为这两种酶能切割形成不同的黏性末端，使得目的基因与目的基因、载体和载体之间无法连接,而目的基因和质粒却能够连接。
(4)
A、核糖体由蛋白质和rRNA构成，可以利用酶的专一性用蛋白酶将蛋白质水解，从而提纯rRNA，A正确；
B、无水乙醇可以溶解所有光合色素，没有利用生物分子间的特异性结合，B错误；
C、分子杂交手段是利用了碱基互补配对的原则，C正确；
D、抑制成熟基因的mRNA与催化成熟酶基因的mRNA之间发生了碱基互补配对，也利用了分子间特异性结合，D正确。
故选ACD。
(5)从变异的角度看，基因工程的原理是基因重组；而植物细胞杂交的原理是染色体变异。
【题目】下表是某同学在做几个实验时所列举的实验材料和实验条件等相关内容，请据表回答下列问题：
组别 | 材料 | 实验条件 | 观察内容 |
A | 植物油 | 苏丹Ⅲ染液 | 颜色变化 |
B | 新鲜菠菜叶提取出的滤液 | 大试管、滤纸、X液等 | 色素分离情况 |
C | 水绵和颤藻 | 碘液 | 有无染色较深的形态固定的结构 |
D | 紫色洋葱鳞片叶外表皮 | 解离液、30%的蔗糖溶液 | 质壁分离 |
E | 洋葱根尖 | 解离液、龙胆紫染液等 | 观察植物细胞中染色体的数目及形态 |
（1）A组实验所观察到的实验结果是出现_____________颜色。如果吃东西时不慎将植物油滴在衣服上，在清洗过程能将植物油分解的酶是_____________。如果要提高该酶的利用效率，可采用的生物技术是______________技术。
（2）B组实验的X液的主要成分是__________________。
甲乙两同学的B组实验结果有差异，如图。
据图分析，乙同学的实验问题是___________，可能是__________________操作所致。
（3）C组实验结果如下图。
图中甲生物是______，图乙中细胞中带状结构上的B（物质）经染色后呈__________，它是____________________。
（4）D组实验中，如果在显微镜下观察不到质壁分离现象，原因可能是________________________
（5）E组为观察植物细胞的有丝分裂实验。在进行该实验时，主要观察下图__________处的细胞；图B细胞所在区域称为___________区。
