题目内容
【题目】将醋酸菌突变体中与耐酸有关的ALDH基因导入优良醋酸菌中，选育出高发酵速率、耐酸的醋酸菌，用于果醋生产。请分析回答下列问题：
(1)对含有ALDH基因的DNA与质粒用同种限制酶切割后，通过________酶连接形成重组质粒。为获得耐酸的醋酸菌，用________法接种于含高浓度醋酸的培养基进行筛选。将筛选纯化的菌种用________的方法长期保存。
(2)下图表示温度和乙醇浓度对该醋酸菌产酸量的影响。
①醋酸菌能将乙醇转变为________，再将其转变为醋酸。
②研究不同酒精浓度下的最高产酸量时，最好把温度控制为________℃
③酒精发酵后通过出料口检测酒精浓度，将发酵液中酒精浓度调节到4%左右才接种醋酸菌，较高的酒精浓度会使产酸量下降，不适宜接种，原因是_________________________。
(3)为检测发酵过程中醋酸菌数量，将1 mL发酵液稀释100倍后，分别取0.1 mL稀释菌液均匀涂布在4个平板上经适当培养后，4个平板上的菌落数分别为24、139、140、141，据此可得出每毫升发酵液中的活菌数为________个/mL。
【答案】 DNA连接 平板划线(稀释涂布平板) 甘油管藏 乙醛 35(30～35) (较)高浓度的酒精会抑制醋酸菌的生长和代谢 1.4×105
【解析】试题分析：本题考查微生物的培养、分离、基因工程，考查对微生物培养、分离方法和基因工程工具的理解。解答此题，可根据图中坐标确定醋酸菌产酸的适宜温度和酒精度，根据实验目的确定实验的自变量、无关变量。
(1)对含有ALDH基因的DNA与质粒用同种限制酶切割后，通过DNA连接酶连接形成重组质粒。筛选耐酸的醋酸菌，可将受体菌用平板划线(稀释涂布平板)法接种于含高浓度醋酸的培养基进行筛选。将筛选纯化的菌种用甘油管藏的方法长期保存。
(2)①醋酸菌能将乙醇转变为乙醛，再将其转变为醋酸。
②研究不同酒精浓度下的最高产酸量时，温度为无关变量，应保持适宜温度，最好把温度控制为35(30～35)℃。
③较高的酒精浓度(较)会抑制醋酸菌的生长和代谢，会使产酸量下降。
(3)计算每毫升发酵液中的活菌数，应选择菌落数为30～300的培养基进行计数，培养基上的平均菌落数为（139+140+141）/3=140，则每毫升发酵液中的活菌数为140÷0.1×100=1.4×105个/mL。
