题目内容
【题目】资料一：PCR（聚合酶链式反应）三个基本反应步骤是：模板DNA在体外加热至95℃时解旋成单链，温度降至55℃左右，引物与模板单链按碱基互补配对的原则结合，再调至72℃左右时，DNA聚合酶沿5′→3′（磷酸到五碳糖）的方向延伸引物合成互补链。三个步骤完成一次称一个循环。
资料二 ：图1显示了目的基因及其上的限制酶切点，A、B、C、D是四种单链DNA片段；图2是质粒（显示限制酶切点和标记基因），一般来说，为了使切割后的目的基因与运载体结合，往往使用两种限制酶，同时还要破坏载体上的一个标记基因。
根据资料回答：
（1）若利用PCR技术增加目的基因的数量，所用的酶是__________。由图1可知，A、B、C、D四种单链DNA片段中应选取_作为引物，该DNA分子在PCR仪中经过四次循环后，会产生DNA片段__________个。
（2）为了提高目的基因和质粒的重组成功率，同时有利于受体细胞的筛选，应该选择的限制酶是______。如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ对质粒进行切割，假设同时只有任意两个位点被切割且每次机会相等，则形成含有完整抗四环素基因的DNA片段有__________种。
（3）DNA连接酶中既能连接黏性末端又能连接平末端的是__________。将F1的基因导入植物细胞采用最多的方法是____________________。
（4）对基因组文库的描述，不正确的是__________。
A.含有某种生物的全部基因
B.基因中含有启动子和内含子
C.文库的基因是通过受体菌承载的
D.文库中的全部基因可以在物种间交流
【答案】 Taq酶或TaqDNA聚合酶或热稳定的DNA聚合酶均可 B和C 16 PstⅠ和EcoRⅠ 1 T4DNA连接酶 农杆菌转化法 D
【解析】试题分析：据图分析，图1为目的基因，其有5个限制酶切割位点，其中SmnⅠ会破坏目的基因；图2质粒上含有3个限制酶切割位点，都会破坏一个标记基因，为了使得目的基因与质粒不会任意连接，应该选择目的基因两侧不同的限制酶，且只能破坏质粒中非一个标记基因，因此应该选择PstⅠ和EcoRⅠ。
（1）PCR技术扩增目的基因的过程需要耐高温的DNA聚合酶；DNA复制时是从3’端向5’端进行的，因此DNA扩增过程所选的引物应为图1中B、C；该DNA分子在PCR仪中经过四次循环后，会产生DNA片段16个。
（2）根据以上分析已知，为了提高目的基因和质粒的重组成功率，防止其任意连接，同时有利于受体细胞的筛选，应该选择的限制酶是PstⅠ和EcoRⅠ；如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ对质粒进行切割，且同时只能切割其中的两个位点，因此只有限制酶PstⅠ、EcoRⅠ切割时才能获得完整的含有抗四环素基因的DNA片段。
（3）常用的DNA连接酶有E·coli-DNA连接酶和T4DNA连接酶，其中后者既能连接黏性末端又能连接平末端；将目的基因导入不同的受体细胞方法不同，导入植物细胞常用农杆菌转化法。
（4）基因文库包括基因组文库和部分基因文库，其中基因组文库包含某种生物所有的基因，而部分基因文库只包含某种生物的部分基因，如cDNA文库，A正确；基因的结构包括非编码区和编码区，非编码区含有启动子、终止子等，编码区包括外显子和内含子，B正确；基因文库是指将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入到受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，C正确；基因组文库中部分基因通过基因工程技术，可以在物种间交流，D错误。
