题目内容
【题目】科学家将外源目的基因与大肠杆菌的质粒进行重组，并在大肠杆菌中成功表达。下图表示构建重组质粒和筛选含目的基因的大肠杆菌的过程。请据图回答问题：
(1)步骤①和②中常用的工具酶是________________和________________。
(2)经过①和②步骤后，有些质粒上的________________基因内插入了外源目的基因，形成重组质粒。
(3)步骤③是________________的过程。为了促进该过程，应该用________处理大肠杆菌。
(4)步骤④是将三角瓶内的大肠杆菌接种到含有四环素的培养基A上培养，目的是筛选________________。能在A中生长的大肠杆菌有________种。
(5)步骤⑤是用无菌牙签挑取A上的单个菌落，分别接种到B(含氨苄青霉素和四环素)和C(含四环素)两个培养基的相同位置上。一段时间后，菌落的生长状况如上图所示。含有目的基因的菌落位于(填“B”或“C”) ________上，请在图中相应位置上圈出来。
__________
【答案】（1）限制性内切酶、DNA连接酶
（2）氨苄青霉素抗性
（3）将重组质粒（目的基因）导入大肠杆菌（受体细胞） CaCl2溶液
（4）含四环素抗性基因的大肠杆菌 2种
（5）E （圈两个菌落2分）
【解析】试题分析：
（1）步骤①表示用限制酶切割质粒和含目的基因的DNA片段，步骤②表示用DNA连接酶将目的基因与质粒连接起来。
（2）由图中限制酶切割位置可知，目的基因插入的位置是氨苄青霉素抗性基因中。
（3）步骤③表示将重组质粒（目的基因）导入大肠杆菌（受体细胞）；为了促进该过程，应该用CaCl2溶液处理大肠杆菌，使其成为感受态细胞。
（4）培养基C是选择培养基，其中含有四环素，专一筛选含四环素抗性基因的大肠杆菌；能在C中生长的大肠杆菌有2种，分别是抗四环素和同时抗四环素和抗氨苄青霉素的大肠杆菌。
（5）D培养基中大肠杆菌对四环素和氨苄青霉素都有抗性，而E中的大肠杆菌只抗一种四环素，所以在E中对应区域（D中没有菌落的部位），该处为转基因大肠杆菌。
