题目内容
【题目】肺细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员在体外利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制，其影响机理如图，请回答下列问题：
（1）利用基因工程技术抑制肺癌细胞的增殖过程中，还需使用 技术。
（2）获取let-7基因后欲进行基因扩增应采用 技术，其依据的原理是 。
（3）基因表达载体构建过程中需使用的工具有 。将基因表达载体导入肺癌细胞的常用方法是 。
（4）根据图示分析，可从细胞中提取 进行分子杂交，以直接检测let-7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中 （RASmRNA/RAS蛋白）含量减少引起的。
【答案】（1）动物细胞培养
（2）PCR DNA双链复制
（3）限制性核酸内切酶（或限制酶）、DNA连接酶、运载体 显微注射法
（4）RNA（或mRNA） RAS蛋白
【解析】
试题分析：（1）利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞前，需使用动物细胞培养技术以培养癌细胞。
（2）获取let-7基因后欲进行基因扩增应采用PCR技术，其依据的原理是：DNA双链复制的原理。
（3）基因表达载体构建过程中需使用的工具有限制性核酸内切酶（或限制酶）、DNA连接酶、运载体。将基因表达载体导入动物（肺癌）细胞的常用方法是显微注射法。
（4）判断目的基因是（let-7基因）否在受体细胞中转录，可用分子杂交技术来进行检测，从细胞中提取RNA（或mRNA）和用放射性同位素或者荧光标记的目的基因单链DNA片段进行杂交。根据题中信息“肺组织细胞中的let7基因表达减弱，癌基因RAS表达就增强，引发肺癌”，导入let7基因后，肺癌细胞受到抑制，说明RAS基因表达减弱，导致细胞中的RAS蛋白含量减少，进而导致癌细胞受抑制。
