Question

【题目】某质粒上有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因。利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如图所示，请回答下列问题：

（1）若利用PCR技术获取抗盐基因，需利用_____________寻找抗盐基因的位置并进行扩增。

（2）将含有抗盐基因的烟草细胞培养为烟草植株需借助_______________技术。

（3）在构建重组质粒时，应选用_______________两种酶对质粒和抗盐基因的DNA进行切割，以保证重组DNA序列的惟一性。

（4）为了确定抗盐烟草是否培育成功，既要用放射性同位素标记的_______________作探针进行分子杂交检测，又要用_______________方法从个体水平鉴定烟草植株的耐盐性。

Answer 1

【答案】 引物 植物组织培养 SalⅠ和 HindⅢ 抗盐基因 一定浓度的盐水浇灌（或“移栽到盐碱地中”）

【解析】试题分析：根据题意和图示分析可知：质粒和含抗盐基因的DNA片段上均有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三种限制性核酸内切酶酶切位点。在质粒上，这三种限制酶的切割位点都位于抗四环素基因上，用其任何一种酶都会破坏四环素抗性基因；在含抗盐基因的DNA片段上，BamHⅠ位于目的基因上，用BamHⅠ切割会破坏目的基因。

（1）若利用PCR技术获取抗盐基因，需利用引物寻找抗盐基因的位置并进行扩增。

（2）将抗盐基因导入烟草细胞后，利用植物组织培养技术获得含有抗盐基因的烟草植株。

（3）要SalⅠ酶切割含有目的基因的DNA与质粒，形成相同的黏性末端，容易发生自身连接和反向接入；HindⅢ会破坏目的基因；则在构建重组质粒时，应选用SalⅠ、HindⅢ两种酶对质粒和含抗盐基因的DNA进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性。

（4）探针是指用放射性同位素标记的目的基因（抗盐基因）；除了从分子水平上进行检测，还可以从个体水平上进行鉴定，即用一定浓度的盐水浇灌烟草植株来鉴定烟草的耐盐性。