Question

【题目】蓝藻兼具微生物和植物的优点，是一种独特的基因工程受体系统。很多蓝藻含有质粒，但其质粒不能直接作为运载体，需要构建成穿梭质粒表达载体，才能使目的基因在蓝藻中有效的复制和表达。回答下列问题：

(1)据图1推测，与普通基因表达载体相比，穿梭质粒表达载体既能在___________中复制，也能在___________中复制。为了筛选转入了穿梭质粒表达载体的蓝藻，应在选择性培养基中添加___________。

(2)若大肠杆菌作为受体细胞时，应选用___________处理使其成为感受态细胞。采用基因枪法将目的基因导人蓝藻前，可使用___________(填“纤维素酶和果胶酶”或“溶菌酶”或“胶原蛋白酶”)去除蓝藻的细胞壁。

(3)已知DNA复制时，子链的延伸方向是5′→3′。使用PCR技术检测转基因蓝藻中是否存在人胸腺素基因可选择图2中1、2、3、4四种单链DNA片段中的___________作为引物，此过程还需要___________酶。

Answer 1

【答案】大肠杆菌 蓝藻 卡那霉素 Ca2+ 溶菌酶 2和3 热稳定DNA聚合酶(或Taq酶)

【解析】

据图分析，图1为构建成的穿梭质粒表达载体，其中含有大肠杆菌质粒复制原点、蓝藻质粒复制起点、启动子、终止子、卡那霉素抗性基因等结构，图2为人胸腺素基因；植物细胞壁的成分是纤维素和果胶，纤维素酶和果胶酶用于去除植物细胞壁，胶原蛋白酶用于动物细胞培养中使细胞分散开，据此分析。

（1）据图1推测，与普通基因表达载体相比，穿梭质粒表达载体既能在大肠杆菌中复制，也能在蓝藻中复制。为了筛选转入了穿梭质粒表达载体的蓝藻，应在选择性培养基中添加卡那霉素。

（2）若大肠杆菌作为受体细胞时，应选用CaCl2处理使其成为感受态细胞。采用基因枪法将目的基因导人蓝藻前，要去掉其细胞壁，纤维素酶和果胶酶用于去除植物细胞壁，胶原蛋白酶用于动物细胞培养中使细胞分散开，因此去除蓝藻的细胞壁可用溶菌酶。

（3）据图2分析，由于DNA复制时，子链的延伸方向是5′→3′，因此设计引物时应选择2、3，PCR还需要热稳定的DNA聚合酶(或Taq酶)。