题目内容
【题目】利用细胞工程技术制备抗人绒毛膜促性腺激素(HCG)单克隆抗体,其主要流程如下。请回答下列问题:
①取免疫后的B淋巴细
胞与骨髓瘤细胞融合
②用HAT选择培养
基筛选出杂交瘤细胞③将杂交瘤细胞接种到多孔细胞培
养板上,筛选出抗体检测阳性细胞④体外培养获得抗
HCG单克隆抗体
(1)制备抗HCG单克隆抗体过程中,用到的动物细胞工程技术有______和______。
(2)细胞DNA合成有D和S两条途径,其中D途径能被氨基嘌呤阻断。在HAT培养基中加入了氨基嘌呤,杂交瘤细胞能连续增殖,未融合细胞以及同种融合细胞因不能增殖而死亡。由此可判断,骨髓瘤细胞DNA合成存在______(填“D”“S”或“D和S”)途径,杂交瘤细胞存在____途径。
(3)步骤③需对选择培养的杂交瘤细胞进行克隆化培养及抗体检测,该过程一般在多孔细胞培养板上进行。先将细胞悬浮液稀释到7~10个细胞/mL,再在每个培养孔中滴入0.1 mL细胞稀释液,其目的是___。
(4)用抗HCG单克隆抗体作为诊断试剂,能在妊娠初期即可作出诊断,主要是因为该抗体具有____的优点。
【答案】 动物细胞融合 动物细胞培养 D D和S 使每个孔内不多于一个细胞,达到单克隆培养的目的 特异性强、灵敏度高
【解析】单克隆抗体的制备过程是：对小动物注射抗原，从该动物的脾脏中获取效应B细胞，将效应B细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选出能产生单一抗体的杂交瘤细胞，克隆化培养杂交瘤细胞（体内培养和体外培养），最后获取单克隆抗体。诱导动物细胞融合的方法有：物理法（离心、振动）、化学法（聚乙二醇）、生物法（灭活的病毒）。单克隆抗体的两次筛选：①筛选得到杂交瘤细胞（去掉未杂交的细胞以及自身融合的细胞）；②筛选出能够产生特异性抗体的细胞群；两次抗体检测：专一抗体检验阳性。
（1）根据单克隆抗体的制备过程分析可知，该过程使用了动物细胞融合技术和动物细胞培养技术。
（2）根据题意，在HAT培养基中加入了氨基嘌呤，则D途径会被阻断，结果是杂交瘤细胞能连续增殖,而未融合细胞以及同种融合细胞因不能增殖而死亡，说明骨髓瘤细胞DNA合成只存在D途径，而杂交瘤细胞DNA合成同时存在D途径和S途径。
（3）步骤③需对选择培养的杂交瘤细胞进行克隆化培养及抗体检测，为了使每个孔内不多于一个细胞，达到单克隆培养的目的，一般在多孔细胞培养板上进行，先将细胞悬浮液稀释到7~10个细胞/mL，再在每个培养孔中滴入0.1mL细胞稀释液。
（4）单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高、化学性质单一、可大量制备等优点。
