题目内容
【题目】科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗，其技术流程如下图。请回答相关问题：
(1)过程①获得重组胚胎之前，需要通过____________技术获得重组细胞。
(2)将基因导入ES细胞而不是导入到上皮细胞，是因为__________________。
(3)步骤③中，需要构建含有干扰素基因的__________。由于DNA复制时，子链只能由5′向 3′方向延伸，故构建前利用PCR技术扩增干扰素基因时，可以从图2中A、B、C、D四种单链DNA片段中选取_______________作为引物。对干扰素基因片段和质粒进行酶切时，可选用限制酶的组合为________________或_______________。
(4)将步骤③获得的ES细胞在荧光显微镜下观察，选择发___________色荧光的细胞进行体外诱导。为检测干扰素基因是否表达，可以采用_____________的方法。
【答案】核移植 ES细胞具有发育的全能性基因表达载体B和CHindⅢ和PstⅠEcoRⅠ和PstⅠ绿抗原-抗体杂交
【解析】
本题以图文结合为情境综合考查学生对动物细胞核移植、基因工程的基本操作程序、胚胎干细胞等相关知识的识记和理解能力，以及获取信息、分析问题的能力。
(1) 图1是利用胚胎干细胞（ES 细胞）对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗的流程，其中过程①采用了动物细胞核移植技术。
(2) 图1中的ES细胞是取自于囊胚期的内细胞团。ES细胞在功能上具有发育的全能性，体外诱导ES细胞可以使其向不同方向分化，所以将目的基因导入ES细胞而不是上皮细胞。
(3) 步骤③是将干扰素基因（目的基因）导入ES细胞中，在导入之前需要构建含有干扰素基因的基因表达载体。因DNA复制时，子链总是从5′向 3′方向延伸，子链与模板链反向平行，所以利用PCR技术扩增干扰素基因时，可以从图2的A、B、C、D四种单链DNA片段中选取B和C片段作为引物。由图2可以看出，用限制酶SmaⅠ切割会破坏干扰素基因，为将完整的干扰素基因切割下来，需要利用限制酶组合HindⅢ和 PstⅠ或 EcoRⅠ和 PstⅠ切割干扰素基因的两端，这样也可以使如图3所示质粒上保留一个完整的标记基因，即绿色荧光蛋白基因。
(4) 综上分析，在构建的重组质粒上，红色荧光蛋白基因的结构已经被破坏，但绿色荧光蛋白基因的结构完整，因此将步骤③获得的 ES 细胞在荧光显微镜下观察，应选择只发绿色荧光的细胞进行体外诱导。为检测干扰素基因是否表达，需采用抗原-抗体杂交技术，若有杂交带出现，表明干扰素基因已经成功表达。
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