题目内容
【题目】金属硫蛋白（MT）是一类广泛存在的金属结合蛋白，某研究小组计划通过PCR技术扩增获得目的基因，构建转基因工程菌，用于重金属废水的净化处理。PCR扩增过程示意图如下，引物1和引物2分别与MT基因两端的序列互补。下列表述正确的是（ ）
A.引物1和引物2的序列相同，且序列已知
B.步骤1需要解旋酶，步骤2需要耐高温的DNA聚合酶，步骤3需要DNA连接酶
C.第三轮循环后，可扩增出2个所需要的目的基因分子
D.为方便构建重组质粒，可在引物中设计适当的限制性核酸内切酶位点
【答案】CD
【解析】
PCR技术：
1、概念：PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术。
2、原理：DNA复制。
3、前提条件：要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一对引物。
4、条件：模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶（Taq酶）。
5、过程：①高温变性：DNA解旋过程；②低温复性：引物结合到互补链DNA上；③中温延伸：合成子链．PCR扩增中双链DNA解开不需要解旋酶，高温条件下氢键可自动解开。
A、引物1和引物2的序列互补配对，A错误；
B、步骤1高温变性，不需要解旋酶，B错误；
C、第一轮循环后没有得到目的基因，第二轮循环后得到两条目的基因的模板链，第三轮循环后便可得到2个目的基因，C正确；
D、构建重组质粒，首先要用限制酶切割含目的基因的DNA片段和质粒，所以位于目的基因两端的引物中需要增加适当的限制性核酸内切酶位点，D正确。
故选CD。
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