题目内容
【题目】乙醇等"绿色能源"的开发备受世界关注。利用玉米秸秆生产燃料酒精的大致流程为：
（1）玉米秸秆预处理后，因该选用____酶和____酶形成纤维二糖，再使用___________酶使之转化为发酵所需的葡萄糖。
（2）从以下哪些微生物中可以提取上述酶？________（多选）
A．酿制果醋的醋酸菌B．生长在腐木上的霉菌C．制作酸奶的乳酸菌D．反刍动物瘤胃中生存的某些微生物
（3）若从土壤中分离产生这种酶的微生物，所需要的培养基为______（按功能分），培养基中的碳源为__________。微生物在纯化培养时常用方法是________和_________。
（4）在生产糖液的过程中，为了使酶能够反复利用，可采用___________技术。
（5）为测定培养液中某细菌数量，某小组同学抽取1mL培养液经10倍的梯度稀释后进行接种培养，每个培养基上接种量为0.1mL，随后对每个培养基中出现的菌落进行计数（结果如下）。培养液中菌体数目约为__________________个/mL
稀释次数 | 4 | 5 | 6 | ||||||
培养基编号 | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
菌落数目 | 263 | 321 | 345 | 38 | 4 | 40 | 6 | 2 | 8 |
【答案】C1CX葡萄糖苷酶B D选择培养基纤维素平板划线法稀释涂布平板法固定化酶（固定化细胞）3.9×107
【解析】
1、用植物秸秆生产酒精是利用微生物进行发酵的过程。植物秸秆中的有机物主要是纤维素，纤维素分解菌产生的纤维素酶能将其水解成葡萄糖。从土壤中分离纤维素分解菌的一般步骤是：土壤取样、选择培养、梯度稀释、涂布培养和筛选菌株。筛选纤维素分解菌必须使用以纤维素为唯一碳源的选择培养基，并且需要做产纤维素酶发酵葡萄糖的实验进行酶活性的检测。2、常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法，平板划线分离法的过程是：由接种环以菌操作沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。
（1）玉米秸秆预处理后，因该选用C1酶和CX酶形成纤维二糖，再使用葡萄糖苷酶使之转化为发酵所需的葡萄糖。
（2）由于纤维素分解酶存在于分解纤维素的微生物中，故应从富含纤维素的环境中去寻找纤维素分解菌，则应从生长在腐木上的霉菌和反刍动物瘤胃中生存的某些微生物中提取。故选：BD。
（3）若从土壤中分离产生这种酶的微生物，所需要的培养基按功能分为选择培养基，培养基中的碳源为纤维素。微生物在纯化培养时常用方法是平板划线法和稀释涂布平板法。
（4）在生产糖液的过程中，为了使酶能够反复利用，可采用固定化酶（固定化细胞）技术。
（5）统计菌落数目时，应该统计平板中菌落数目在30—300的，而第4次稀释后统计到的数目只有一个平板小于大于30小于300，第6次稀释后各平板统计的数目均小于30，这两次稀释后统计的数目误差较大，统计时应除去这两组数据。第5次稀释后统计的菌落数目有一个平板小于30，因此第5次稀释后两个平板上菌落的平均值为（38+40）/2=39个，因此培养液中菌体数目约为39/0.1×105=3.9×107个。
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