题目内容
【题目】实时荧光定量PCR简称qPCR，灵敏度高特异性好，是目前检测微小残留病变的常用方法。将标有荧光素的Taqman探针与待测样本DNA混合后，在变性、复性、延伸的热循环中，与待测样本DNA配对结合的Taqman探针被Taq酶切断，在特定光激发下发出荧光（如下图所示），随着循环次数的增加，荧光信号强度增加，通过实时检测荧光信号强度，可得Ct值（该值与待测样本中目的基因的个数呈负相关）。
（1）做qPCR之前，需要先根据目的基因的核苷酸序列合成__________。除此之外，qPCR的反应体系还需要加入___________、_________和___________。
（2）在反应过程中，___________为新链的合成提供能量。
（3）医务人员对三位慢性粒细胞白血病患者（由B基因过量表达导致）进行治疗后，想检测治疗效果，利用上述技术写出实验思路和简要结果分析。
实验思路：__________________简要结果_____________________________
【答案】引物和Taqman探针 待测样本（模板DNA） dNTP 热稳定的DNA聚合酶（Taq酶） dNTP 三位患者分别编号甲、乙、丙，分别抽取适量血样提取RNA，反转录得到cDNA，根据B基因的序列设计引物和探针，进行PCR扩增，检测荧光信号强度 三位患者检测的Ct值越小，说明治疗效果越好，反之，治疗效果越差
【解析】
PCR技术：
1、概念：PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术。
2、原理：DNA复制。
3、前提条件：要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一对引物。
4、条件：模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶（Taq酶）。
5、过程：①高温变性：DNA解旋过程（PCR扩增中双链DNA解开不需要解旋酶，高温条件下氢键可自动解开）；低温复性：引物结合到互补链DNA上；③中温延伸：合成子链。
（1）PCR需要根据目的基因的核苷酸序列合成引物，同时qPCR还需要Taqman探针与待测样本DNA混合，所以还需要合成Taqman探针；在反应体系中还需要添加待测样本（模板DNA）、dNTP、热稳定的DNA聚合酶（Taq酶）。
（2）在反应过程中，dNTP为新链的合成提供能量。
（3）根据题干信息“将标有荧光素的Taqman探针与待测样本DNA混合后，在变性、复性、延伸的热循环中，与待测样本DNA配对结合的Taqman探针被Taq酶切断，在特定光激发下发出荧光，通过实时检测荧光信号强度，可得Ct值（该值与待测样本中目的基因的个数呈负相关）”；
所以设计实验思路：三位患者分别编号甲、乙、丙，分别抽取适量血样提取RNA，反转录得到cDNA，根据B基因的序列设计引物和探针，进行PCR扩增，检测荧光信号强度；
结果：Ct值越小，说明治疗效果越好，反之，治疗效果越差。
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