题目内容
【题目】草鱼病毒性出血病是由草鱼呼吸孤病毒（GCRV）引起的，目前尚未找到防治药物．如图是通过基因工程方法将PV7双基因与某质粒连接，并通过草鱼攻毒实验检测免疫保护效果的过程示意图．图中P10和PH为启动子，箭头表示转录方向．PV71和PV72为GCRV外壳蛋白基因（DNA片段）．请回答下列问题：
草鱼病毒性出血病核酸疫苗实验鱼的死亡率和免疫保护率记录表
组别 | 疫苗注射量 | 实验鱼数 | 死亡鱼数 | 死亡率 | 免疫保护率 |
1 | 10μg | 20尾 | 0尾 | 0 | 100% |
2 | 30μg | 20尾 | 0尾 | 0 | 100% |
3 | 60μg | 20尾 | 1尾 | 5% | 95% |
空载体 | 30μg | 20尾 | 6尾 | 30% | 70% |
对照 | 0 | 20尾 | 20尾 | 100% | 0 |
（1）制备草鱼病毒性出血病核酸疫苗，获取大量PV7双基因时可采用PCR技术进行扩增，该技术除需要原料、模板、________外，还必须用________酶．PCR一般要经历三十次以上的循环，每次循环包括变性、复性和延伸三个阶段，其中复性降低温度的作是______．
（2）使用不同的限制酶切割PV71和PV72基因，是为了防止_____________，用不同限制酶先后两次切割质粒，是为了防止_____________，有利于提高核酸疫苗构建的成功率．
（3）攻毒实验检测是指将不同浓度的核酸疫苗导入草鱼体内，通过转录和翻译产生草鱼呼肠孤病毒外壳蛋白，使草鱼生成抗体和记忆细胞，同时给草鱼注入相同浓度的GCRV，我，统计草鱼免疫保护率，实验结果说明_______________ ．导入空载体（普通质粒）的草鱼免疫保护率达到70%，但草鱼体内并未检测到抗体水平的明显增加，可能的原因是________________________．核酸疫苗注射后，科学家发现PV7双基因在启动子的驱动下持续表达，至第49天核酸疫苗仍没有被降解，仍能检测到PV7双基因的转录．综上所述，与常规基因工程生产的蛋白质疫苗相比，核酸疫苗所具备的优点有_____．
【答案】引物热稳定DNA聚合（或Taq）让引物结合与互补DNA链上连接的位置错误质粒自身环化核酸疫苗起到了保护草鱼、预防草鱼病毒性出血病的作用导入草鱼体内的空载体（普通质粒）能提高草鱼的非特异性免疫能力抗原性强、保护时间长、安全性好、制备和运输方便
【解析】
分析题图：图中P10和PH为启动子，箭头表示转录方向．PV71和PV72为GCRV外壳蛋白基因（DNA片段），分析表格：组别5是对照组，与对照组相比，注射疫苗量在10ug～60ug时，草鱼病毒性出血病核酸疫苗实验鱼的死亡率都几乎为0，即免疫保护率几乎均为100%，组别4注射导入普通质粒的草鱼免疫保护率达到了70%。
（1）PCR技术是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，PCR扩增目的基因时，除需要原料、模板、引物外，还需热稳定DNA聚合酶，每次循环需经过模板在高温（或90-95℃、受热）条件下变性，解旋为单链、复性（引物与DNA单链结合），热稳定DNA聚合酶在适当温度下催化DNA链延伸合成三步。
（2）启动子P10能启动PV71基因的转录，PH能启动PV72基因的转录，用不同的限制酶切割质粒PV71、PV72基因是为了防止连接位置错误，用不同的限制酶先后两次切割质粒，是为了防止质粒向身环化，还有利于提高核酸疫苗构建的成功率。
（3）实验结果说明核酸疫苗起到了保护草鱼、预防草负病毒件出血病的作用，导入空载体（普通质粒），草鱼体内并未检测到抗体水平的明显增加，可能的原因是空载体（普通质粒）能提高草鱼的非特异性免疫能力，所以免疫保护率提高．与常规基因工程生产的蛋白质疫苗相比，核酸疫苗具有抗原性强、保护吋问长、安全性好、制备和运输方便等优点。
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