题目内容
【题目】抗凝血酶Ⅲ蛋白是一种血浆糖蛋白，临床上主要用于血液性疾病的治疗。凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶。下列是生产这两种酶的相关思路，请回答下列问题：
（1）图1为通过培育转基因奶牛获得抗凝血酶Ⅲ蛋白的流程。
①图中过程a指的是利用________法将目的基因导入受精卵，受体细胞不选用体细胞的理由是___________________________________________________________________________。
②在胚胎移植前，需进行____________，目的是确定要培育的个体能产奶。
③可采用________法来鉴定牛奶中是否含有抗凝血酶Ⅲ蛋白。
（2）从牛胃液中分离得到的凝乳酶以其催化能力强而被广泛应用，研究人员运用基因工程技术，将编码该酶的基因转移到了微生物细胞中。
①从牛胃细胞中提取mRNA，再通过________形成cDNA。以此cDNA为模板通过PCR扩增目的基因，有时需要在引物的5′端设计________(填“限制酶”、“DNA连接酶”或“RNA聚合酶”)识别序列，以便构建重组DNA分子。
②下图是该基因工程中使用的质粒，如果至少使用一种限制酶对此质粒进行切割，则可以形__种不同的DNA片段，其中含有完整抗四环素基因的DNA片段有__________种。
【答案】显微注射 动物体细胞的全能性一般不能表现 性别鉴定 抗原—抗体杂交 逆转录 限制酶 9 3
【解析】
目的基因导入受体细胞的方法因受体细胞的种类不同而有差异。动物体细胞的全能性会随着细胞分化程度的提高而逐渐受到抑制，故克隆动物需要移植细胞核。限制酶作用的结果是使特定位点被切开，对于环状DNA分子，限制酶切一次会得到线性DNA。
（1）①图中过程a指的是利用显微注射法将目的基因导入受精卵，由于动物体细胞的全能性一般不能表现，故受体细胞一般不选用体细胞。
②需要将转基因受体细胞培育成转基因奶牛，只有母牛才能产奶，故在胚胎移植前，需进行性别鉴定，目的是确定要培育的个体能产奶。
③若鉴定牛奶中是否产生抗凝血酶Ⅲ蛋白，属于翻译水平的检测，常采用抗原-抗体杂交方法检测。
（2）①以提取的mRNA为模板，获得DNA的过程为逆转录。PCR技术用于快速的扩增目的基因，而基因工程中需要用限制酶来切割DNA，故目的基因两末端应有限制酶的识别序列，以便获取目的基因，构建重组DNA分子，故以此cDNA为模板通过PCR扩增目的基因，有时需要在引物的5′端设计限制酶的识别序列，以便构建重组DNA分子。
②据图可知，由于质粒上含有三种限制酶的酶切位点，故分别用一种酶切割，可得到三种线性DNA，若用两种限制酶同时切割，可获得2+2+2=6种不同的DNA片段，若三种酶同时切割，可获得三种DNA片段，但与第二种情况切割获得的DNA有重复，故如果至少使用一种限制酶对此质粒进行切割，则可以形9种不同的DNA片段，由于HindⅢ的酶切位点在抗四环素基因上，故使用HindⅢ时，抗四环素基因被破坏，故含有完整抗四环素基因的DNA片段有3种。
寒假乐园北京教育出版社系列答案
