Question

【题目】含有限制酶的细胞中通常还具有相应的甲基化酶，这两种酶对 DNA 分子有相同的作用序列，但具有不同的催化功能。甲基化酶可以对 DNA 序列进行修饰，使限制酶不能对这一序列进行识别和切割。回答下列问题：

（1）目前，基因工程中使用的限制酶主要是从__________生物中分离纯化获得的，鉴定其化学本质可用_____________________。构建“基因组文库”和“cDNA文库”的过程中需要使用DNA连接酶的是____________(填“基因组文库”、“cDNA 文库”或“基因组文库和 cDNA 文库”）。

（2）含有某种限制酶的细胞，可以利用限制酶切割外源 DNA，但不破坏细胞自身的 DNA，其原因可能有①_______________________；②__________________________。

（3）DNA分子复制过程需要引物，引物是一小段____________。体外扩增DNA的PCR技术的中文名称是______________，PCR一般要经历三十多次循环，每次循环可分为变性、复性和延伸三步。在循环之前，常要进行一次预变性，以便_______________________

Answer 1

【答案】原核 双缩脲试剂 基因组文库和cDNA文库 细胞自身的 DNA 分子没有该限制酶的识别序列 甲基化酶对细胞自身的 DNA 分子进行了修饰 DNA或RNA(核酸) 多聚酶链式反应 增加大分子模板DNA彻底变性的概率

【解析】

基因工程的基本操作程序：

1、目的基因的获取：（1）目的基因是指： 编码蛋白质的结构基因。（2）获取方法：①从基因文库中获取；②人工合成（反转录法和化学合成法）；③PCR技术扩增目的基因。

2、PCR技术：①概念:PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术；②原理：DNA复制；③前提条件：要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一对引物；④条件：模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶酶)；⑤过程：高温变性:DNA解旋过程扩增中双链DNA解开不需要解旋酶，高温条件下氢键可自动解开)；低温复性：引物结合到互补链DNA上：中温延伸：合成子链。

（1）基因工程中常会使用到限制性内切酶，而限制性内切酶主要是从原核生物中分离纯化获得的，限制性内切酶的化学本质是蛋白质，故鉴定其化学本质可用双缩脲试剂；在构建我们现代的“基因组文库”和“cDNA”文库的过程中，所获取的基因都需要导入到受体菌的群体中储存起来，因此都需要使用到的DNA连接酶。

（2）对于某种限制酶切割一定的DNA序列来言，如果细胞自身的DNA分子没有该限制酶的识别序列，或者甲基化酶对细胞自身的DNA分子进行了修饰，那么由于酶的专一性，这种限制性酶就不会对细胞本身发挥作用，可以切割外源的DNA，但是不会破坏细胞自身的DNA。

（3）DNA分子复制过程的引物是一小段DNA或RNA(核酸)。PCR技术的中文名称是多聚酶链式反应，PCR在循环之前，常要进行一次预变性，以便增加大分子模板DNA彻底变性的概率。