Question

【题目】一般情况下，一定浓度的抗生素会杀死细菌，但变异的细菌可能产生耐药性。在实验室连续培养细菌时，如果向培养基中添加抗生素，耐药菌有可能存活下来。某研究小组欲通过观察细菌在含有抗生素的培养基上的生长状况，探究卡那霉素对大肠杆菌的选择作用，实验步骤如下：

①制作经______法灭菌的牛肉膏蛋白胨液体培养基及固体培养基平板；

②用记号笔在平板的______（填“皿盖”或“皿底”）画两条相互垂直的直线，将平板分为4个区域，分别标号为a、b、c、d；

③取少量的大肠杆菌的培养液，用无菌的______将其均匀地涂抹在培养基平板上；

④设置a号区域为对照组，其余区域为实验组，进行相关操作；

⑤将平板______（填“正放”或“倒置”）于37℃的恒温箱中培养12～16小时；

⑥观察培养基上大肠杆菌的生长状况，看滤纸片附近是否出现了抑菌圈。如果有（如图示），从抑菌圈边缘的菌落上挑取细菌，接种到已灭菌的液体培养基中培养，然后重复步骤③～⑤。如此重复几代，记录每一代培养物中实验组抑菌圈直径的平均值。

问答下列问题。

（1）将以上实验步骤补充完整：①________②________③________⑤________。

（2）步骡④中，实验组的操作是________。

（3）在连续培养几代后，抑菌圈的平均直径________（填“不变”、“变小”或“变大”），原因是________。

Answer 1

【答案】高压蒸汽灭菌 皿底 涂布器 倒置 用无菌的镊子分别夹取1张含卡那霉素的滤纸片放在b、c、d区域的中央，盖上皿盖 变小 卡那霉素对大肠杆菌起选择作用，随着培养次数增多，耐药菌的比例增大

【解析】

选择培养基：根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基使混合菌样中的劣势菌变成优势菌，从而提高该菌的筛选率。

稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

（1）①培养基需要经过高压蒸汽灭菌法灭菌；

②由于平板需要倒置，所以在皿底划线作为标记；

③将菌液均匀的涂布需要经过灭菌的涂布器进行涂布；

⑤平板需要倒置培养。

（2）本实验的目的是探究卡那霉素对大肠杆菌的选择作用，所以实验组需要用无菌的镊子分别夹取1张含卡那霉素的滤纸片放在b、c、d区域的中央，盖上皿盖。

（3）由于卡那霉素对大肠杆菌起选择作用，随着培养次数增多，耐药菌的比例增大，所以抑菌圈直径变小。