Question

【题目】刚果红能够与纤维素形成红色复合物，可用其鉴定纤维素分解菌。某研究小组将滤纸埋在土壤中，30天后从滤纸上取6 g土壤样品加入30 mL生理盐水中溶解，得到了富有纤维素分解菌的菌原液，并进行如下实验，回答下列问题：

(1)稀释菌原液：为确定合适的稀释倍数，小组成员取1 mL菌原液进行如下图所示的操作，在统计菌落时，发现平板上的平均菌落数为40个，则每毫升菌原液中的细菌数大约为________个。

(2)培养基的准备：在对培养基进行高压蒸汽灭菌的过程中，完成加水、装锅、加热排气、保温保压适当时间后，切断热源，让灭菌锅内温度自然下降，________，打开排气阀，旋开固定螺栓，开盖，才可以取出灭菌的培养基等物品。待培养基冷却至50℃左右时倒平板，在培养基凝固之前加入灭菌的刚果红，从功能上来看，该培养基属于________培养基，培养基中碳源主要是________。　

(3)接种与观察：在无菌条件下，用________取0.1 mL稀释后的菌悬液进行图1中________所示的操作，室温放置2～3分钟后倒置于恒温箱中培养，室温放置2～3分钟的目的是__________________。培养过程中定期观察菌落特征和透明圈的大小，图2中D/d的值越________，表示该菌对纤维素分解能力越强。

Answer 1

【答案】4×106 压力表的压力降为零 鉴别 纤维素 移液枪(移液管) 甲 使菌液完全被培养基吸收 大

【解析】

刚果红染色法原理：刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物。当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红——纤维素的复合物便没法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。

（1）分析题图可知菌原液被稀释了10000倍，每毫升菌原液中的细菌数大约为40╳10╳10000=4×106个。

（2）培养基的准备：在对培养基进行高压蒸汽灭菌的过程中，完成加水、装锅、加热排气、保温保压适当时间后，切断热源，让灭菌锅内温度自然下降，压力表的压力降为零，打开排气阀，旋开固定螺栓，开盖，才可以取出灭菌的培养基等物品。待培养基冷却至50℃左右时倒平板，在培养基凝固之前加入灭菌的刚果红，刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物，故从功能上来看，该培养基属于鉴别培养基，培养基中碳源主要是纤维素。　

（3）接种与观察：在无菌条件下，用移液枪(移液管)取0.1 mL稀释后的菌悬液进行图1中甲所示的操作，室温放置2～3分钟后倒置于恒温箱中培养，室温放置2～3分钟的目的是使菌液完全被培养基吸收。培养过程中定期观察菌落特征和透明圈的大小，根据刚果红染色法原理，图2中D/d的值越大，表示该菌对纤维素分解能力越强。