题目内容
【题目】为增加油菜种子的含油量,研究人员尝试将酶D基因与位于叶绿体膜上的转运肽基因相连,导入油菜细胞并获得了转基因油菜品种。
(1)研究人员依据基因的已知序列设计引物,采用__________技术从陆地棉基因文库中获取酶D基因,从拟南芥基因文库中获取转运肽基因。在上述引物设计时,分别在引物中加入上图所示酶的识别序列,这样可以用____________________酶处理两个基因后,得到____________端(填图中字母)相连的融合基因。
(2)将上述融合基因插入右图所示Ti质粒的T-DNA中,构建_______________并导入农杆菌中。将获得的农杆菌接种在含______________的固体平板上培养得到单菌落,再利用液体培养基震荡培养,可以得到用于转化的浸染液。
(3)剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间,此过程的目的是_________________________,进一步筛选后培养获得转基因油菜。
(4)提取上述转基因油菜的mRNA,在____________酶的作用下获得cDNA,再依据融合基因的DNA片段设计引物进行扩增,对扩增结果进行检测,可判断融合基因是否________。
【答案】PCR ClaⅠ(限制酶)和DNA连接 A、D 表达载体(或“重组质粒”) 四环素 利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞 逆转录 转录
【解析】
1、基因文库包括cDNA文库、基因组文库等。某个群体包含一种生物所有的基因的文库叫基因组文库,而用某种生物发育的某个时期的mRNA反转录产生的多种互补DNA片段属于cDNA文库。
2、限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列,并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开,因此具有专一性。同种限制酶切割能够产生相同的黏性末端,便于质粒和目的基因连接。
(1)扩增目的基因常用PCR技术。切割获得酶D基因和转基因肽基因时,应该用同种限制酶,以获得相应的黏性末端。因此,可用ClaⅠ限制酶和DNA连接酶处理两个基因后,得到A、D端相连的融合基因。
(2)将上述融合基因插入右图所示Ti质粒的T-DNA中,构建基因表达载体即重组质粒并导入农杆菌中。由于质粒上含有四环素抗性基因作为标记基因,所以将获得的农杆菌接种在含四环素的固体平板上培养得到单菌落。
(3)剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间,此过程的目的是利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞。
(4)提取上述转基因油菜的mRNA,在逆转录酶的作用下获得cDNA,再依据融合基因的DNA片段设计引物进行扩增,对扩增结果进行检测,可判断融合基因是否完成转录。