题目内容
用基因工程技术可使大肠杆菌合成人的胰岛素。下列叙述不正确的是
- A.DNA连接酶和细菌质粒等运载体是构建重组质粒必需的工具酶
- B.导入大肠杆菌细胞内的基因不一定成功表达
- C.可用含抗生素的培养基检测大肠杆菌中是否导入了重组质粒
- D.常用相同的限制酶处理目的基因和质粒
口算题卡加应用题集训系列答案
圆褐固氮菌是自生固氮菌，为经济有效地提高农作物产量，人们一直在努力研究、寻找固氮基因。对基因的研究常常因研究样品中DNA含量太低而难以进行，PCR技术有效地解决了这个问题。如今对基因的深入研究使人类跨入了蛋白组研究时代，从复杂的细胞混合物中提取、分离高纯度的蛋白质是该研究要做的基本工作之一。
（1）某同学在做微生物实验时，不小心把圆褐固氮菌样品和酵母菌样品混在一起，已知青霉素会影响固氮菌的生长繁殖，但不影响真菌的生长繁殖。请填空完成分离这两种菌的主要实验步骤：
①分别配置 的培养基和 的培养基，分别分成两份，依次标上A、a、B、b备用；
②分别向A、B培养基接种 ；
③把接种后的培养基放在恒温箱中3d—4d；
④从A、B培养基上生长的 中挑取生长良好的菌株，分别接种到 中；
⑤ 。
（2）用基因工程技术从经过分离、提纯的圆褐固氮菌中获取固氮基因，然后进行PCR扩增。下列表1和表2分别表示用PCR扩增固氮基因的反应体系及反应条件。
| PCR反应体系 | 50ul |
| 缓冲液 | 5ul |
| 脱氧核苷酸 | 1ul |
| 引物A | 0.5ul |
| 引物B | 0.5ul |
| DNA聚合酶 | 0.5U |
| 模板DNA | 1-2ul |
| 加去离子水补足至50 ul | |
| 反应条件 | ||
| 温度 | 时间 | |
| 变 性 | 95℃ | 30s |
| 复 性 | 55℃ | 30s |
| 延 伸 | 72℃ | 1min |
| 30个循环后 | 适宜 | 5-10min |
| 保 温 | 4℃ | 2h |
①从上表中可得出，PCR技术与DNA复制相比较，主要区别之一是 。
此外，从反应条件看，所使用的DNA聚合酶应具有__________的特点。每次循环都需要2种引物的主要原因是_______________ ________________。
②下图为第1轮循环产生的产物。请绘出以a链和b链为模板经PCR扩增的产物。
（3）在对固氮基因产物的生产研究中，需要从复杂的细胞混合物中提取、分离高纯度的蛋白质。下图表示蛋白质提取和分离实验涉及的相关原理。
①图甲表示相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶色谱法分离的过程。试管中收集到的液体最先出现的是相对分子质量较大的蛋白质，原因是 。
②图乙所示实验模拟电泳现象，U型管左侧的颜色逐渐变深，原因是 。
，则能与该载体连接的抗病基因分子末端是……………………………………………………( )
