题目内容
【题目】（四）生物工程
图1是科学家用转基因（大鼠生长激素基因）方法培育“巨型小鼠”过程中的一个步骤。图2为3种质粒和1个含目的基因的DNA片段，其中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因，都可以作为标记基因。复制原点是质粒上必需的一段复制起始的序列，与重组质粒的自主复制有关。
【1】图1表示基因工程中的________（步骤），该步骤采用的技术方法是________。
【2】据图2，为构建重组质粒，应使用限制酶________（Pvu Ⅰ / EcoR Ⅰ）进行切割。其中，质粒A、质粒C不能作为此目的基因运载体的原因是________。
【3】在分离提纯限制酶EcoR Ⅰ的过程中，能使EcoR Ⅰ沉淀的方法是________。
A. 溶菌酶等酶解细菌细胞壁
B. 超声波、压力等
C. 改变pH或加入硫酸铵
D. 添加稳定剂和填充剂
【4】研究人员用交联法固定化EcoR Ⅰ，用戊二醛作为交联剂，使酶交联在一起，限制酶的移动，如图3所示。但发现固定化后的EcoR Ⅰ的活性比未固定化的要低，其最可能的原因是戊二醛________。
A. 增加了酶的分子量
B. 改变了部分酶的活性部位的空间结构
C. 占据了酶的活性部位
D. 分解了部分的酶
【答案】
【1】重组DNA分子导入受体细胞显微注射法
【2】Pvu I质粒A缺少标记基因；质粒C在用与目的基因相同的限制酶切割时，复制原点会被限制酶切割，从而影响重组质粒的自主复制
【3】C
【4】D
【解析】基因工程四部曲为：获取目的基因（从基因组文库中获取或、利用PCR技术扩增目的基因）；基因表达载体的构建（这也是基因工程的核心）；将目的基因导入受体细胞（植物、动物、微生物）；目的基因的检测与鉴定 （DNA分子杂交技术,分子杂交技术、抗原抗体杂交）。
【1】据图分析，图1表示用显微注射法将重组DNA导入受体细胞的过程。
【2】分析题图可以发现，要想构建基因表达载体，必须使用限制酶PvuⅠ对于目的基因进行切割；质粒A中没有标记基因，质粒C中限制酶PvuⅠ的切割部位在复制圆点内部，会破坏质粒的功能，影响重组质粒的自主复制，因此质粒A、质粒C不能作为此目的基因运载体。
【3】在分离提纯限制酶EcoR Ⅰ的过程中，能使EcoR Ⅰ沉淀的方法是改变pH或加入硫酸铵，故选C。
【4】用戊二醛作为交联剂，使酶交联在一起，限制酶的移动，结果发现固定化后的EcoR Ⅰ的活性比未固定化的要低，可能的原因是戊二醛分解了部分的酶，故选D。
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