题目内容

【题目】经研究发现,PVY-CP基因位于某种环状DNA分子中。将 PVY-CP基因导入马铃薯,使之表达即可获得抗PVY病毒的马铃薯。下图表示构建基因表达载体的过程,相关酶切位点如下表,以下说法错误的是(

Bam

Hind

Bg1

Sma

GGATC C

C CTAGG

AAGCT T

T TCGAA

AGATC T

T CTAGA

CCCGGG

GGGCCC

A.推测Klenow酶的功能与DNA聚合酶类似

B.由步骤③获取的目的基因有1个黏性末端

C.步骤④应选用的限制酶是BamHⅠ和Sma

D.NPTⅡ基因可能是用于筛选的标记基因

【答案】C

【解析】

分析题图:图示是获得抗病毒马铃薯的部分操作,步骤①~③是从质粒A中获取目的基因(PVY-CP)的过程;质粒B是选用的运载体;④过程需要用限制酶处理质粒B;⑤表示基因表达载体的构建过程,该过程需要DNA连接酶。

A、由图可知,步骤②中用Klenow酶处理后,黏性未末端变成平未端,说明Klenow酶能催化DNA链的合成,从而将DNA片段的粘性末端变成平末端,故Klenow酶的功能与DNA聚合酶类似,A正确;

B、经过步骤③后,目的基因(PVY-CP)的一侧是BamHI切割形成的黏性未端。目的基因(PVY-CP)的另一侧是平未端,B正确;

C、由B可知:步骤④中应该使用的限制酶是BamHISmaIC错误;

DNPTⅡ基因可能是用于筛选的标记基因,D正确。

故选C

练习册系列答案
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【题目】正常细胞不能合成干扰素,但含有干扰素基因。我国科学家釆用基因工程技术生产干扰素a-2b已实现量产。具体做法是将产生干扰素的人白细胞的mRNA分离,反转录得到干扰素基因。将含有四环素、氨苄青霉素抗性基因的质粒PBR322和干扰素基因进行双酶切,用连接酶连接。将重组载体DNA分子在一定条件下导入大肠杆菌,在培养基中筛选培养,检测干扰素的表达量,选出高效表达的工程菌。请回答:

1)在分化诱导因子作用下,正常细胞可以摆脱抑制、合成干扰素,该过程发生的实质是________________________________

2)据下图分析,构建重组载体DNA分子时,可以选用_____两种限制酶对质粒pBR322和干扰素基因进行双酶切,目的是既能保证目的基因和质粒正向连接,又能防止_____________________________(答两点)

3)将重组质粒导入大肠杆菌中,然后将细菌涂布到含_____的选择培养基上培养,就可得到含质粒PBR322或重组质粒的细菌单菌落;再从每一个单菌落中挑取部分细菌转涂到含有_____的培养基上,不能生长的绝大部分是含有重组质粒的细菌,原因是_____

4)干扰素在体外保存非常困难,如果将其分子中的一个半胱氨酸变成丝氨酸,在-70°C 条件下可以保存半年。实现这一转变需要直接对_____进行修饰或改造,这属于蛋白质工程的范畴。

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