Question

【题目】如图是绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程示意图，请据图同答：
（1）分析可知，科学家获取绿色荧光蛋白基因所运用的限制酶是图中所示的 ， 最终获得的绿色荧光蛋白基因的末端类型属于 ．
（2）图示工程中，将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞的过程③称为 ， 常用的方法是 ．
（3）图示中，作为受体细胞的去核卵母细胞一般处在期，常通过（物理方法）进行激活，使其完成减数分裂和发育进程．
（4）培养图示重组细胞时，将细胞所需的营养物质按其种类、数量严格配制而成的培养基称为培养基．通常在培养基中还需要加入适量的等天然成分．
（5）图示重组细胞培养至一定阶段可通过方法，从而一次获得多个转基因猪．过程⑧的实质是 ．

Answer 1

【答案】
（1）PstⅠ和EcoRⅠ；黏性末端
（2）转化；显微注射法
（3）MⅡ中（减数第二次分裂中）；电脉冲（或电刺激）
（4）合成；血清（或血浆）
（5）胚胎分割、胚胎移植；早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移
【解析】解：（1）图中所示的限制酶PstI和EcoRⅠ可以切割DNA片段，获取绿色荧光蛋白基因，并不能破坏目的基因．限制酶切割产生的DNA片段末端不平整，即末端为黏性末端．（2）转化是指将目的基因进人受体细胞内，并在受体细胞内维持稳定和表达的过程．如图示将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞的过程．因受体细胞为动物细胞，常用的方法是显微注射法．（3）受体细胞常选用去核卵（母）细胞的原因：卵（母）细胞大，容易操作；卵（母）细胞质多，营养丰富；含有促使细胞全能性表达的物质．一般取处在MⅡ中（减数第二次分裂中）期的去核卵母细胞作为受体细胞的，通过电脉冲（或电刺激）进行激活，使其完成减数分裂和发育进程．（4）培养图示重组细胞时，将细胞所需的营养物质按其种类、数量严格配制而成的培养基称为合成培养基．动物细胞所需的营养物质：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然物质．通常在培养基中还需要加入适量的血清（或血浆）等天然成分．（5）胚胎分割采用机械方法将早期胚胎切割，经移植获得同卵双胚或多胚，从而获得较多基因型相同的转基因猪．图示重组细胞培养至桑椹胚或囊胚，可通过胚胎分割、胚胎移植方法，从而一次获得多个转基因猪．过程⑧是胚胎移植过程，其实质是早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移． 所以答案是：（1）PstⅠ和EcoRⅠ黏性末端；（2）转化；显微注射法；（3）MⅡ中（减数第二次分裂中）；电脉冲（或电刺激）；（4）合成；血清（或血浆）；（5）胚胎分割、胚胎移植；早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移
【考点精析】解答此题的关键在于理解基因工程的原理及技术的相关知识，掌握基因工程的原理是利用DNA重组技术，以及对动物细胞与组织培养过程的理解，了解取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）→剪碎→用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养．