Question

【题目】溶藻细菌对控制水华有非常重要的作用。研究人员从池塘中采集水样，加人到无菌锥形瓶中，用摇床在37℃下振荡培养20 min，使其均匀分散成菌悬液，再通过分离、纯化、鉴定得到了溶藻细菌。请回答下列问题：

（1）分离前需用无菌移液管从菌悬液中吸取菌液1mL，进行梯度稀释，其目的是___________。再取每个稀释度的菌悬液0.1mL用___________法接种到细菌固体培养基上，每个梯度做三组，37℃恒温培养箱中培养，直至长出菌落。

（2）若将1mL菌悬液梯度稀释106倍，再取0.1mL接种到细菌固体培养基上，分别形成了260、280、270个菌落，则原菌悬液中每毫升有细菌___________个，该方法所得测量值一般比实际值偏___________，原因是_________________________________。

（3）水华为蓝藻暴发所致。研究人员尝试利用溶藻细菌限制蓝藻数量，相关实验如图所示（图中①⑥表 示实验步骤）。

如果在步骤⑤实验组的每个培养皿中做三个重复实验，可采取的做法是：_______________。为完善实验设计方案，应增设对照组，可采取的做法是：_________________________________。蓝藻通常呈蓝绿色，观察实验结果，发现培养皿中出现褪色空斑，说明蓝藻_________________________________。

Answer 1

【答案】使水样中的各种微生物细胞分散开来稀释涂布平板2.7×109 低当两个或多个细胞连在一起时平板上观察到的只是一个菌落在每个培养皿中，选择三个不同位置，各滴加等量菌液在对照组的每个培养皿中，选择三个不同位置，各滴加等量的、不含溶藻细菌的细菌培养液被溶藻细菌裂解（死亡）

【解析】

由题文描述可知：该题综合考查学生对微生物的实验室培养、微生物的分离与计数等相关基础知识的识记和理解能力，以及能对一些简单的实验方案做出恰当的评价和修订能力。

(1)为了使水样中的各种微生物细胞分散开来，分离前需用无菌移液管从菌悬液中吸取菌液1mL，进行梯度稀释。然后采用稀释涂布平板法，将其接种到细菌固体培养基上。

(2)若将1mL菌悬液梯度稀释106倍，再取0.1mL接种到细菌固体培养基上，分别形成了260、280、270个菌落，则原菌悬液中每毫升有细菌的个数＝（260＋280＋270）÷3÷0.1×106＝2.7×109个。由于当两个或多个细胞连在一起时平板上观察到的只是一个菌落，所以该方法所得测量值一般比实际值偏低。

(3) 本实验的目的是探究溶藻细菌对蓝藻数量的影响，自变量是溶藻细菌的有无。依据实验设计遵循的对照原则、等量原则、重复原则并结合题意“在每个培养皿中做三个重复实验”可知，为了能够达到实验目的，实验组的设置是在每个培养皿中，选择三个不同位置、各滴加等量菌液，而对照组的设置则是在每个培养皿中，选择三个不同位置，各滴加等量的、不含溶藻细菌的细菌培养液。由图示信息可知：先单独光照培养蓝藻，在培养皿中先形成蓝绿色菌斑；后加入溶藻细菌培养液。由于溶藻细菌可将蓝绿色菌斑里的蓝藻分解，导致蓝藻裂解死亡，所以最终使蓝绿色菌斑褪色成为空斑。可见，如果培养皿中出现褪色空斑，说明蓝藻被溶藻细菌裂解死亡。