题目内容
【题目】2008年诺贝尔化学奖授予了三位在研究绿色荧光蛋白（GFP）方面做出突出贡献的科学家。绿色荧光蛋白能在蓝光或紫外光的激发下发出荧光，这样借助GFP发出的荧光就可以跟踪蛋白质在细胞内部的移动情况，帮助推断蛋白质的功能。下图为我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图，据图回答：
（1）以上培育过程中应用到的生物技术有 。（任选两个）
（2）目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白，黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是： （用数字表示）。
①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列③蓝色荧光蛋白基因的修饰（合成）④表达出蓝色荧光蛋白。
（3）使用培养基进行胚胎干细胞培养时，通常要加入 等天然成分。
（4）图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制性内切酶切取目的基因、切割质粒。限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。①请画出质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端 。在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能连接起来，理由是： 。
【答案】（1） 基因工程、核移植、早期胚胎培养、 胚胎移植任选两个
（2）②①③④ （3）血清
（4）------G GATCC-----------
------ CCTAG 或 G-------
两个不同的限制酶切割产生的黏性末端互补（答“相同且互补”也给分）
【解析】（1）以上培育过程中应用到的生物技术有基因工程、核移植、早期胚胎培养、 胚胎移植（2）目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白，黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是：②①③④
①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列③蓝色荧光蛋白基因的修饰（合成）④表达出蓝色荧光蛋白。
（3）使用培养基进行胚胎干细胞培养时，通常要加入血清等天然成分。
（4）图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制性内切酶切取目的基因、切割质粒。限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。那么质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端为
------G GATCC-----------
------ CCTAG 或 G-------
在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能连接起来，理由是两个不同的限制酶切割产生的黏性末端互补
