Question

下图(一)为某基因工程中利用的质粒筒图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRⅠ、BamHⅠ的酶切位点，amp^R为青霉素(抗生素)抗性基因，tct^R为四环素(抗生素)抗性基因，P为启动因子，T为终止子，ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoRⅠ、BamHⅠ在内的多种酶的酶切位点。下图(二)为几种酶作用于基因的位置。请回答下列问题：

(1)在基因工程中常用的工具有三种：一是用作切取目的基因的_________酶；二是将目的基因与运载体拼接的_________酶；三是作为运载体的质粒。
(2)将含有目的基因的DNA与经特定的酶切后的动载体(质粒)进行拼接形成重组DNA，理论上讲，重组DNA可能有“____________”、“____________”、“___________”三种，其中有效的(所需要的)基因表达载体是____________，因此需要对这些拼接产物进行分离提纯。
(3)利用图(一)所示的质粒拼接形成的3种拼接产物(基因表达载体)与无任何抗药性的原核宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的拼接产物(基因表达载体)是_______。
(4)有效的基因表达载体成功导入受体细胞进行表达时，首先需要进行转录，RNA聚合酶识别和结合的位点是图(一)中的________。在动物基因工程中，将基因表达载体导入受体细胞的常用方法是________。在植物基因工程中，将基因表达载体导入受体细胞的常用方法是_________。是因为这种微生物很容易侵染到_________中，从而把它的Ti质粒上的_________转移到受体细胞染色体的DNA上。
(5)在基因工程中，作用于图(二)所示a位置的酶是____________；作用于b位置的酶是____________。

Answer 1

(1)限制(限制性核酸内切酶)      DNA连接
(2)目的―目的基因  目的基因―运载体   运载体―运载体   目的基因―动载体
(3)运载体―运载体和目的基因―运载体
(4)P(启动子)      显微注射法    农杆菌转化法    双子叶植物和裸子植物      T-DNA
(5)限制酶(限制性内切酶)       DNA解旋酶