题目内容
【题目】肺细胞中的let－7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let－7基因导入肺癌细胞实现了在细胞内表达。该基因工程技术基本流程如图1。
请回答：
(1)获取let－7基因后可采用____________技术进行扩增，进行过程①时，将let－7基因与载体重组，需要的两类酶是____________________和______________。载体上RNA聚合酶识别和结合的部位称为__________。
(2)进行过程②时，如出现贴壁生长现象，可用__________酶处理，以利于传代培养。
(3)从细胞水平上，研究人员知道let－7基因成功表达的依据是__________________。
(4)进一步研究发现，let－7基因能影响癌基因RAS的表达，其影响机理如图2。据图分析，可通过______________________________方法 ，以直接检测let－7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中____________(填“RAS mRNA”或“RAS蛋白”)含量减少引起的。
【答案】PCR 限制性核酸内切酶(或限制酶) DNA连接酶 启动子 胰蛋白 发现肺癌细胞的增殖受到抑制 从细胞中提取RNA进行分子杂交 RAS蛋白
【解析】
根据题意和图示分析可知：图2表示let-7基因影响癌基因RAS的表达的原理，let-7基因转录产物miRNA与RAS基因转录产物RAS-mRNA结合，使RAS基因翻译受到抑制，引起细胞中的RAS蛋白含量减少，进而导致癌细胞增殖受到抑制。
（1）目的基因扩增常采用PCR技术，其依据的原理是DNA双链复制。过程①为基因表达载体的构建过程，基因表达载体构建过程中需使用限制酶切割目的基因和运载体，然后用DNA连接酶形成重组DNA。启动子是一段有特殊碱基序列的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。故载体上RNA聚合酶识别和结合的部位称为启动子。
（2）动物细胞培养时如出现贴壁生长现象，可用胰蛋白酶处理形成单个细胞，以利于传代培养。
（3）let－7基因成功表达的含义是形成let－7蛋白，根据“肺细胞中的let－7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌”，可知let－7基因成功表达会抑制癌细胞的增殖，故从细胞水平分析，let－7基因成功表达的依据是发现肺癌细胞的增殖受到抑制。
（4）根据图示分析，可从细胞中提取RNA进行分子杂交，以直接检测let-7基因是否转录。let-7转录形成的RNA可与RASmRNA形成双链，从而阻止RAS蛋白的表达过程，故肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中RAS蛋白含量减少引起的。
【题目】血管性痴呆(VD)是因脑血管阻塞导致脑缺血、缺氧，引起脑神经损伤所致的严重认知功能障碍综合征。常伴随记忆力减退、语言障碍、大小便失禁等症状。
（1）某VD患者不能说话，但能听懂别人讲话，原因可能是损伤了位于_______的语言中枢的S区。大小便失禁的VD患者，其排尿反射的神经中枢位于_______。
（2）为研究白藜芦醇对VD患者学习和记忆的影响，研究人员以大鼠为实验对象开展了相关研究。
将45只健康雄性大鼠随机分成A、B、C三组，分别进行如下表所示的处理。各组大鼠在相同的环境下饲养4周后，进行了水迷宫实验：将大鼠放入水中，进行逃生训练，记录各组平均逃生时间及典型逃生路线，结果分别如图、如图所示。
分组 处理 | A组 | B组 | C组 |
40 mg/kg 白藜芦醇预处理四周 | － | + | |
手术结扎颈动脉（血流量减少30%） | + | + |
注：+表示进行处理；－表示未进行处理
①逃生训练前对A组的处理是___________。
②如图所示的结果为___________。
③综合如图、如图所示结果，可以得出的结论是___________。
（3）神经细胞间传递信息的结构是___________。白藜芦醇对血管性痴呆有一定预防作用，其机理是白藜芦醇能提高大脑皮层神经细胞中PSD95的表达量。nNOS（NO合成酶）与PSD95结合，催化NO产生。NO促进血管扩张，增加脑血流量，从而缓解脑缺血对脑部神经元的损伤。请写出验证上述推测的实验思路及预期结果：___________。
