题目内容
【题目】研究人员利用PCR技术扩增了目的基因，并培育了能合成凝乳酶的转基因酵母菌。请结合下图回答：
（1）利用PCR技术扩增目的基因原理_____________________。左图中引物为单链DNA片段，它是根据___________________的脱氧核苷酸序列合成的。从理论上推测，第2轮循环产物中含有引物A的DNA片段所占的比例为________。
（2）右图所示的基因表达载体中的URA3基因能编码乳清苷5-磷酸脱羧酶，该酶能催化酵母菌尿嘧啶的合成，若酵母菌缺乏乳清苷5-磷酸脱羧酶，就无法生长，除非在培养基中加入尿嘧啶。利用URA3基因作为__________基因来筛选转化成功的酵母菌，要选择_______________的酵母菌作为受体细胞，所使用培养基___________（填“需要”或“不需要”）添加尿嘧啶。
（3）奶酪生产中的凝乳酶是一种分泌蛋白。工业生产过程中，________（能/否）选用大肠杆菌作为受体细胞表达出凝乳酶？原因是______________________。
【答案】 DNA双链复制 目的基因 3/4 标记 缺乏URA3基因（或不能合成乳清苷5-磷酸脱羧酶） 不需要 否 大肠杆菌无内质网和高尔基体（或大肠杆菌无法对蛋白质进行加工和修饰）
【解析】试题分析：本题考查基因工程以及利用PCR技术扩增目的基因的的相关知识，要求学生识记基因工程的操作工具及具体的操作步骤，掌握各步骤中的相关细节；掌握利用PCR技术扩增目的基因的原理及过程，能结合题干信息准确答题，属于考纲识记和理解层次的考查。
（1）PCR技术又称为多聚酶链式反应，是一种在体外迅速扩增DNA片段的技术，它能以极少数的DNA为模板，在几小时内复制出上百万份的DNA拷贝，其原理是DNA双链复制。上面左图中引物为单链DNA片段，它是根据目的基因的脱氧核苷酸序列合成的。根据PCR技术的原理和过程可知，一个亲代DNA复制2次得到4个DNA分子，不含引物A的DNA就一个，其余均含有引物A，故含有引物A的DNA的比例为3/4。
（2）基因表达载体中的URA3基因能编码乳清苷5-磷酸脱羧酶，该酶能催化酵母菌尿嘧啶的合成，若酵母菌缺乏乳清苷5-磷酸脱羧酶，就无法生长，除非在培养基中加入尿嘧啶。利用URA3基因作为标记基因来筛选转化成功的酵母菌，要选择不能合成乳清苷5-磷酸脱羧酶的酵母菌作为受体细胞，所使用培养基不需要添加尿嘧啶。
（3）奶酪生产中的凝乳酶是一种分泌蛋白。由于大肠杆菌无内质网和高尔基体，所以选用大肠杆菌作为受体细胞不能表达出凝乳酶。
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