题目内容
【题目】在荧光素酶中加入正确的荧光素底物就可以发荧光。荧光素酶及其合成基因在生物研究巾有着广泛的应用。请回答下列问题：
(1)荧光素酶基因可以人工合成，也可以从_____中获取。利用PCR技术扩增荧光素酶基因是利用___的原理。
(2)限制酶是切割DNA的工具酶，下图为含有荧光素酶基因的DNA片段及其具有的限制酶切点。若需利用酶切法（只用一种酶）获得荧光素酶基因，最应选择的限制酶是______
(3)荧光素酶基因常被作为基因工程中的标记基因，其作用是________， 荧光素酶基因也可以作为将为目的基因转入某些动植物细胞中表达产生荧光素酶。将目的基因导入植物细胞的技术中，最常用的是____。
(4)下列关于质粒运载体的说法正确的是________（多选）。
A．没有限制酶就无法使用质粒运载体
B．质粒运载体只能在与目的基因重组后进入细胞
C．质粒运载体可能是从细菌或者病毒的DNA改造的
D．质粒运载体的复制和表达也遵循中心法则
E．质粒运载体只有把目的基因整合到受体细胞的DNA中才能表达
(5)将目的基因导入植物细胞，目前常用的目的基因载体是Ti质粒，目的基因需插入到该基因载体的______上。将导入荧光素酶基因的植物细胞，可经过___形成转基因植株。
【答案】 基因文库 PCR MSP1 筛选出含有目的基因的细胞 农杆菌转化法 ACD T-DNA 植物组织培养
【解析】试题分析：分析图表：含有目的基因的外源DNA分子中含有限制酶BamHⅠ、SmaⅠ、MboⅠ和MspⅠ的识别序列和切割位点，其中BamHⅠ的酶切位点在目的基因的中间，SmaⅠ的酶切位点只有一个，SmaⅠ的识别序列中含有MspⅠ的识别序列，因此要获得目的基因可用限制酶MspⅠ切割。
（1）荧光素酶基因可以人工合成，也可以从基因文库中获取。PCR技术的原理是DNA复制。
（2）要获得目的基因必须在目的基因的两侧相应的酶切位点进行切割，图1中可以看出，BamHⅠ的酶切位点在目的基因的中间，故不可取；SmaⅠ的酶切位点只有一个，故不可取；根据表格可以看出，SmaⅠ的识别序列中含有MspⅠ的识别序列，因此要获得目的基因可用限制酶MspⅠ切割。
（4）质粒作为运载体，必须先用同种限制酶切割，才能与目的基因整合重组，A正确；质粒运载体与目的基因没有成功重组也会被导入受体细胞，B错误；质粒运载体可来自细菌，病毒的DNA改造，C正确；质粒的本质是小型环状DNA，其复制和表达遵循中心法则，可独立的在受体细胞表达，D正确，E错误。
（3）标记基因的作用是将含有目的基因的细胞筛选出来。将目的基因导入动物细胞常用显微注射法。
（5）农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上。根据农杆菌的这一特点，如果将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上，通过农杆菌的转化作用，就可以把目的基因整合到植物细胞中染色体的DNA上。将转基因受体细胞培育成转基因植株常用植物组织培养技术。
