题目内容

【题目】根据基因工程的有关知识,回答下列问题。

(1)质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如下:

为使运载体与目的基因相连,含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外,还可用另一种限制性核酸内切酶切割,该酶必须具有的特点是____________

(2)按其来源不同,基因工程中所使用的DNA连接酶有两类,即___________________

(3)若要在体外获得大量反转录产物,常采用____________技术。

(4)基因工程中除质粒外,________________________也可作为运载体。

(5)若用重组质粒转化大肠杆菌,一般情况下,不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞,原因是____________

【答案】切割产生的DNA片段末端与EcoRI切割产生的相同 大肠杆菌DNA连接酶 T4DNA连接酶 PCR λ噬菌体衍生物 动植物病毒 未处理的大肠杆菌吸收质粒(外源DNA)的能力极弱

【解析】

1、限制酶具有专一性,其能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列,并能切断特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键;一般情况下切割目的基因和质粒要用同一种限制酶若两种限制酶切割形成的黏性末端相同,也可以使用

2、DNA连接酶能连接具有相同黏性末端的两个DNA片段,根据酶的来源不同,可以将其分为两类:一类是从大肠杆菌中分离得到的,称为E·coli DNA连接酶;另一类是从T4噬菌体中分离出来的,称为T4DNA连接酶。

(1)为使运载体与目的基因相连,不同的限制酶应切割出相同的黏性末端,故使用的酶应切割产生的DNA片段末端与EcoRI切割产生的相同。

(2)根据酶的来源不同,可以将DNA连接酶分为两类:E·coli DNA连接酶和T4DNA连接酶。

(3)反转录是以RNA为模版来合成DNA的过程。可以在体外短时间内大量扩增DNA的技术叫PCR技术(多聚酶链式反应)。

(4)基因工程中常用的运载体有质粒、动植物病毒和λ噬菌体的衍生物

(5)大肠杆菌细胞外有细胞壁和细胞膜,能阻止其他物质的进入,吸收质粒(外源DNA)的能力极弱,只能通过Ca2+处理细胞,使细胞处于能吸收周围环境中DNA分子的生理状态,这种细胞称为感受态细胞。

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