题目内容
【题目】【生物—选修I:生物技术实践】下图是分离、纯化及保存枯草芽抱杆菌菌株的过程示意图:将土壤表层土稀释液煮沸巧分钟(枯草芽抱杆菌的芽抱不会失去活性)静置5分钟后获得样品，进行如下操作:
请回答下列问题:
(1)可知，除用选择培养基外，还有__________起到筛选作用。
(2)上图的划线操作中，培养基从物质状态分类上属于_______，接种环用____法进行灭菌，划线过程中第一区和最后一区的划线_______________(能/不能)相连。
(3)用稀释涂布平板法在5个培养基平板上，均接种稀释倍数为104的样品液0.1ml,培养一段时间后，平板长出来的菌落数分别为13. 160, 532, 175和187。每毫升样品中的细菌数量为
_______________个。
(4)用上述方法统计出的菌落数往往比样品中活菌的实际数目_____，原因是____。
【答案】 煮沸 固体培养基 灼烧灭菌（灼烧） 不能 1.74×107 少 两个或者多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落
【解析】试题分析：微生物的接种方法：平板划线法和稀释涂布法。
（1）平板划线操作：
①挑取他含菌样品：选用平整、圆滑的接种环，按无菌操作法挑取少量菌种。
②划A区：将平板倒置于煤气（酒精）灯旁,左手拿出皿底并尽量使平板垂直于桌面，有培养基一面向着煤气灯（这时皿盖朝上，仍留在煤气灯旁)，右手拿接种环先在A区划3—4条连续的平行线(线条多少应依挑菌量的多少面定）。划完A区后应立即烧掉环上的残菌，以免因菌过多而影响后面各区的分离效果。在烧接种环时，左手持皿底并将其覆盖在皿盖上方(不要放入皿盖内)，以防止杂菌的污染。
③划其他区：将烧去残菌后的接种环在平板培养基边缘冷却一下，并使B区转到上方，接种环通过A区（菌源区）将菌带到B区，随即划数条致密的平行线。再从B区作C区的划线。最后经C区作D区的划线，D区的线条应与A区平行，但划D区时切勿重新接触A、B区，以免极该两区中浓密的菌液带到D区，影响单菌落的形成。随即将皿底放入皿盖中。烧去接种环上的残菌。
④等平板凝固后，将平板倒置。
（2）稀释涂布法：是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，在适宜条件下培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。能够测定样品中活菌数的方法是：稀释涂布平板法。
（1）枯草芽抱杆菌的芽抱耐高温，所以煮沸可以杀灭枯草芽抱杆菌的芽抱以外的杂菌，起到选择作用。
（2）平板划线法用的是固体培养基，划线前需要用灼烧的方法对接种环灭菌。划线时要避免最后一区的划线与第一区线连，因为最后一区是细菌最稀少的，而第一区是细菌最致密的，如果连在一起则有可能影响单个菌落的分离效果。
（3）根据题干信息，五个数值中13和532相差太大，不予计算，所以每毫升样品中的细菌数量=平板上菌落数的平均值÷体积×稀释倍数=（160+175+187）÷3×104÷0.1=1.74×107个。
（4）由于两个或者多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，所以用上述方法统计出的菌落数往往比样品中活菌的实际数目少。
