题目内容
【题目】人类是乙型肝炎病毒的唯一宿主，接种乙肝疫苗是预防乙肝病毒感染的最有效方法。下图为“转基因酵母乙肝疫苗”的生产过程示意图，该过程所用酵母菌为毕赤酵母菌，其体内无天然质粒，科学家改造出了下图所示的pPIC9K质粒（松弛控制型，复制不受宿主细胞控制）用作载体，其与目的基因形成的重组质粒经酶切后可以与酵母菌染色体发生同源重组，将目的基因整合与染色体组已实现表达。请回答下列问题：
（1）如果要将HBsAg基因和pPIC9K质粒重组，应该在HBsAg基因两侧的A和B位置接上限制酶_________的识别序列，这样设计的优点是可避免质粒和目的基因的自身环化。步骤1应选用___________（填“Ecoli”或“T4”）DNA连接酶。
（2）步骤2的目的是______________________。已知大肠杆菌每20分钟分裂一次，若1个大肠杆菌中导入了 10个重组质粒，则1小时后可从1个大肠杆菌的后代中得到重组质粒的个数___________。
（3）步骤4中应选用限制酶___________切割重组质粒以获得一段线性DNA，然后将其导入毕赤酵母菌细胞。为了确认毕赤酵母菌转化是否成功，应在培养基中加入___________以便筛选。除此以外，还可以用分子杂交技术鉴定上图中的毕赤酵母菌转化是否成功，过程如下图所示:
根据图中显示结果推算，若要获得16个成功导入该基因的酵母菌菌落，则上图中的酵母菌菌落数至少要为___________个。
（4）已知质粒在细胞传代过程中有丢失现象，试分析毕赤酵母表达系统的遗传稳定性高于大肠杆菌表达系统的主要原因_________________________________。
【答案】 SnaBr和AvrⅡ T4 获得大量重组质粒（扩增） 不确定 BglⅡ 卡拉霉素 120 目的基因整合到酵母染色体上，不易丢失
【解析】试题分析：重组质粒上的目的基因若要表达，需要目的基因的首尾含有启动子和终止子。分析题图，图中质粒含有SnaBⅠ、AvrⅡ、BglⅡ和SacⅠ限制酶切割位点，其中SacⅠ位于启动子上，BglⅡ不在启动子与终止子之间，因此要将HBsAg基因和pPIC9K质粒重组，同时防止自身环化，只能用限制酶SnaBⅠ和AvrⅡ切割质粒，则应该在HBsAg基因两侧的A和B位置接上SnaBⅠ和AvrⅡ限制酶的识别序列。
（1）根据以上分析已知，在HBsAg基因两侧的A和B位置接上SnaBⅠ和AvrⅡ限制酶的识别序列；根据表格分析可知，SnaBⅠ和AvrⅡ限制酶切割后漏出的分别是平末端和粘性末端，因此步骤1构建基因表达载体时，应该用T4 DNA连接酶。
（2）步骤2将重组质粒导入大肠杆菌，让其在大肠杆菌体内复制，以获得大量的重组质粒。已知大肠杆菌中导入了10个重组质粒，且20分钟分裂一次，但是不能确定细胞分裂过程中重组质粒是否都复制，且是否平均分配到子细胞中去，因此不能确定1小时后可从1个大肠杆菌的后代中得到重组质粒的个数。
（3）根据链状DNA两端的箭头和图纹可知，切割其的限制酶是BglⅡ；切割后仍然具有卡拉霉素抗性基因，但是丢失了氨苄青霉素抗性基因，因此为了确认毕赤酵母菌转化是否成功，应在培养基中加入卡拉霉素以便筛选。根据图形分析可知，15个酵母菌中有2个是毕转化成功的赤酵母菌，因此若要获得16个成功导入该基因的酵母菌菌落，则上图中的酵母菌菌落数至少要为15÷2×16=120个。
（4）已知质粒在细胞传代过程中有丢失现象，而毕赤酵母表达系统的遗传稳定性高于大肠杆菌表达系统，说明目的基因整合到了酵母染色体上，不易丢失。
开心蛙口算题卡系列答案【题目】细胞周期按时间顺序可分为四个时期:G1、S、G2和M期，如图甲所示，各时期所发生的主要生理变化及部分调控因子如下表。请回答下列问题：
时期 | 主要生理变化 | 部分调控因子 |
G1 | 为遗传物质DNA的合成作准备 | CDK4 CDK2（G1/S 转换） |
S | DNA合成 | CDK2 |
G2 | 主要完成蛋白质的合成，为进入分裂期作准备 | CDK1（G2/M 转换） |
M | 核膜消失，染色体等发生变化 | CDK1 |
G0 | 静息状态，细胞不生长，也不分化 | |
（1）DNA聚合酶作用于细胞周期的___________期（填字母），纺锤体形成于___________期（填字母）调控因子___________的表达量增多，促进细胞周期从G1期向S期过渡。
（2）G1期如果缺少某些必需的营养成分（如必需氨基酸），细胞会终止其G1期的进程，进入________期（填字母），一旦补充了所缺少的成分后，细胞将回到G1期，这种调节的意义是可以避免___________。
（3）若图甲中的1、2、3、4为一个细胞周期中的部分检查点，在DNA发生损伤时有阻滞细胞周期的作用。当DNA损伤出现在___________期（填字母）时，CDK1形成的复合物滞留在细胞质中，不能进入细胞核内发挥作用，阻止细胞进入下一时期，可以推测检查点最可能是图甲中的___________（填数字）。
（4）胸苷（TdR）双阻断法可使细胞周期同步化，若G1、S、G2、M期依次为10h、7h、3h、1h，经常一次阻断，S期细胞立刻被抑制，其余细胞最终停留在G1/S交界处；洗去TdR可恢复正常的细胞周期，若要是所有细胞均停留在G1/S交界处，第二次阻断应该在第一次洗去TdR之后___________h到___________h进行。
