题目内容
【题目】自生固氮菌可不与其它植物共生，能独立完成固氮作用，在农业生产中具有广泛的用途。研究人员欲从土壤中筛选高效的自生固氮菌株进行研究。请回答下列问题：
（1）在配制含琼脂的培养基和倒平板的过程中，下列选项不需要的是________(填序号）。
①酒精灯 ②接种环 ③高压蒸汽灭菌锅 ④棉塞
（2）要从土壤样品中分离出自生固氮菌，在获得土壤浸出悬液后，可以采用稀释涂布平板法将菌液涂布于________培养基上进行筛选。在下图所示的四种菌落分布图中，不可能是用该方法得到的是_______。
（3）稀释涂布平板法还可用于检验土壤中自生固氮菌的含量，上图中用该方法得到的菌落分布图中，最符合计数要求的是图中的_________。用该方法统计样本菌落数时是否需要设置对照组？__________。为什么？______________________________________。
（4）分别取0.1mL、已稀释103倍的土壤浸出液，分别涂布到3个琼脂固体培养基的表面进行培养，培养基记录到自生固氮菌的菌落平均数为130。则每g土样中自生固氮菌为__________。该方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是____________。
【答案】 ② 缺氮 D C 需要 培养基制备不合格会导致菌落数増加 1.3×106 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落
【解析】
自生固氮菌是指在土壤中能够独立进行固氮的细菌，可以利用氮气作为氮源，所以培养基中不需要加氮源。稀释涂布平板法是将菌液进行一系列梯度稀释，然后将不同梯度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基上，进行培养，在稀释度足够高的菌液离，聚集在一起的微生物被分散成单个细胞，从而获得由单细胞繁殖而来的菌落。对微生物进行分离、计数常用的接种方法是稀释涂布平板法，估算每毫升样品中的细菌数时，往往选取30～300的平板，取至少三个平板的平均值，每毫升样品中的细菌数=（平板的平均菌落数÷涂布的体积）×稀释的倍数。
（1）平板培养基配制的基本流程为：计算→称量→溶化（包括琼脂）→调节pH→分装→灭菌→倒平板→（冷却后）倒置平板，因此该过程不需要接种环接种，故选②。
（2）自生固氮菌是指在土壤中能够独立进行固氮的细菌，所以培养基中不需要加氮源；据图分析，前三个平板是稀释涂布平板法接种获得的，第四个平板是平板划线法接种获得的，故选D。
（3）图中C平板的细菌的稀释度大小合适，是最符合计数要求的；培养基制备不合格会导致菌落数増加，所以用该方法统计样本菌落数时需要设置对照组，以判断培养基是否被杂菌污染（培养基灭菌是否合格）。
（4）每g土样中自生固氮菌数=130×103÷0.1=1.3×106个。当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，所以该方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。
