Question

【题目】研究人员利用小鼠的单倍体ES细胞（只有一个染色体组），成功培有出转基因小鼠。其主要技术流程如下图所示，请分析并回答下列问题：

注；Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ代表四种限制酶。箭头指向的位置为限制酶的切割位点；Amp＇是氨苄青霉索抗性基因，Neo＇是G418抗性基因。

（1）利用PCR技术可以扩增目的基因，PCR反应体系中除含缓冲液、模板DNA、dNTP、引物外，还应含有__________；引物应选用下图中____________（填图中字母）。

注：A、B、C、D是引物，箭头是延伸方向。

（2）在基因工程操作步骤中，过程①②称为___________，重组质粒上的抗生素抗性基因可作为___________。已知氨苄青霉素不能有效杀死小鼠细胞，而一定浓度的G418能有效杀死不具有Neor的小鼠细胞。结合上图推测，过程①选用的两种限制酶是__________（填图中的编号），③处的培养液应添加__________（填“氨苄青霉素”或“G418”）。

（3）据图分析，细胞乙发育成桑椹胚的过程中细胞分裂方式是_____________，将细胞乙培养成桑椹胚的技术称为___________技术。

Answer 1

【答案】热稳定性DNA聚合酶（Taq酶） A和D 基因表达载体的构建 标记基因 Ⅰ和Ⅱ G418 有丝分裂 早期胚胎培养

【解析】

1、PCR反应的条件：模板DNA、dNTP（包含dATP、dCTP、dGTP、dTTP）、引物、耐高温的DNA聚合酶，其中，dNTP的作用是合成DNA的原料、提供能量。

2、基因工程的操作步骤为：

提取目的基因、构建基因表达载体、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测和鉴定。

（1）根据分析可知，PCR反应体系中除含缓冲液、模板DNA、dNTP（包含dATP、dCTP、dGTP、dTTP）、引物以外，还应含有耐高温的DNA聚合酶。为了扩增目的基因的片段，根据图示可知需要在引物A和D作用下以目的基因的两条链为模板合成子代目的基因。

（2）由图可知，过程①②是将目的基因和运载体连接形成重组质粒，即基因表达载体的构建过程。重组质粒上的抗生素抗性基因可作为标记基因，其作用是有利于筛选出含有目的基因的细胞。根据题意可知，氨苄青霉素不能有效杀死小鼠细胞，而一定浓度的G418能有效杀死不具有Neo′的小鼠细胞，因此应选择Neo′作为标记基因，即质粒上Neo′不能用限制酶切割，则过程①应选用Ⅰ和Ⅱ两种限制酶，图中③处的培养液应添加G418以便于起到筛选的作用。

（3）细胞乙发育成桑椹胚的过程中进行的是有丝分裂。将细胞乙培养成桑椹胚的技术称为早期胚胎培养技术。