Question

【题目】已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基蝶呤阻断。人淋巴细胞中 有这两种 DNA 的合成途径，但一般不能无限增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有 S 途径，但能不断分裂增 殖。将这两种细胞在培养皿中混合，加促融剂促进细胞融合，获得杂种细胞，并生产单克隆抗体。请 回答：

（1）生产单克隆抗体时，一般不直接利用一个B淋巴细胞，主要原因是____。

（2）①过程中，常用的与植物细胞融合不同的诱导方法是____ 。

（3）②过程为_培养；为了从培养液中分离出杂种细胞，需在②过程向培养液中加入__________， 理由是杂交瘤细胞可利用____途径合成 DNA，从而才能在该培养液中增殖。

（4）③过程的目的是选育出____ 细胞，需要进行克隆化培养和抗体检测，克隆化的方法最常用的 是有限稀释法，即稀释细胞到 7～10 个细胞／ml，每孔滴入____ （选填“0.1”或“1”或“10”） ml 细胞稀释液。

（5）④表示杂交瘤细胞的扩大培养，其既可在体外培养，也可注射到小鼠____ 内培养。体内培养与体外培养相比，其优点是____ 。

Answer 1

【答案】B 淋巴细胞不能无限增殖 灭活的病毒 动物细胞 氨基蝶呤 淋巴细胞中的 S 能产生特定抗体的杂交瘤细胞 0.1 腹腔 无需再提供营养物质以及无菌环境，操作简便

【解析】

图中显示了单克隆抗体制备的过程，通过动物细胞融合、动物细胞培养以及根据题干信息设定特定培养基筛选出所需特异性抗体的杂交瘤细胞。单克隆抗体的制备中有两次筛选：第一次筛选出杂交瘤细胞,第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。

（1）淋巴细胞一般不能无限增殖，因此生产单克隆抗体时，一般不直接利用一个B淋巴细胞。

（2）动物细胞融合和植物细胞融合相同的诱导方法是物理法和化学法，动物细胞特有的诱导方法是用灭活的病毒。

（3）动物细胞融合后要进行动物细胞培养，且要进行筛选，从融合细胞中选出杂交瘤细胞，因为细胞合成 DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基蝶呤阻断，而人淋巴细胞中有这两种 DNA 的合成途径，但一般不能无限增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂增殖，因此在培养液中加入氨基蝶呤进行选择，仅有D合成途径的骨髓瘤细胞及其彼此融合的细胞就不能增殖，只有杂交瘤细胞可利用淋巴细胞中的S途径合成DNA，在该培养液中增殖。

（4）③过程的筛选目的是选出能能产生特定抗体的杂交瘤细胞，克隆化培养常用有限稀释法，即稀释细胞到 7～10 个细胞／ml，为了达到单克隆培养的目的，则每个孔中不多于一个细胞，因此每孔滴入0.1 ml 细胞稀释液。

（5）培养杂交瘤细胞可以体外培养，也可以在小鼠的腹腔内培养，单克隆抗体的提取可以在体外培养液中或体内的腹水中提取，体内培养比体外培养具有无需提供营养物质以及无菌环境，操作简便的优点。