题目内容

Taq DNA聚合酶的特点


  1. A.
    耐强酸
  2. B.
    耐强碱
  3. C.
    耐高温
  4. D.
    最适温度37℃
C
点拨:Taq DNA聚合酶是从热泉中一株嗜热细菌中提取到的,此酶具有以下特点:①耐高温,在95℃下反应2 h后其残留活性是原来的40%;在70℃下反应2 h后其残留活性大于原来的90%。②在热变性时不会被钝化,不必每次在扩增后再加新酶。③大大提高了扩增片段特异性和扩增效率,增加了扩增长度。
练习册系列答案
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Taq DNA聚合酶是从一种嗜热细菌中分离提取的,该菌是1966年从美国黄石国家森林公园的一个热泉中发现的。实验表明,PCR反应时变性温度为95 ℃,50个循环后,Taq DNA聚合酶仍有65%的活性。Taq DNA聚合酶的热稳定性是该酶用于PCR的前提条件,也是PCR技术能迅速发展和广泛应用的原因。Taq DNA聚合酶还具有逆转灵活性,其作用类似于逆转录酶。Taq DNA聚合酶表现为Mg2+依赖,该酶的催化活性对Mg 2+浓度非常敏感。测定结果为MgCl2浓度在2.0 mmol/L时该酶催化活性最高,此浓度能最大限度地激活Taq DNA聚合酶的活性,Mg2+过高就抑制酶活性,因而MgCl2的浓度在不同的反应体系中应适当调整,优化浓度。Taq DNA聚合酶具有5′→3′聚合酶活性和5′→3′外切酶活性,而无3′→5′外切酶活性,它不具有校对活性。因而在PCR中如发生某些碱基的错配,该酶是没有校正功能的。Taq DNA聚合酶的碱基错配几率为2.1×10-4

(1)Taq DNA聚合酶在高温下仍保持活性,因此在PCR扩增时可以________加入,________(填“需要”或“不需要”)再添加。

(2)影响PCR反应的影响因素除引物、反应温度、时间和TaqDNA聚合酶浓度外,从材料中可知,还应有________。

(3)这种嗜热细菌能够在热泉中生存,这是________的结果。

(4)PCR中由碱基错配引起的变异属于________。假设对一个DNA进行扩增,第一次循环时某一条模板链上发生碱基错配,则扩增若干次后检测所有DNA的扩增片段,与原DNA相应片段相同的占________。

 

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